论文摘要
目的:青光眼是一种常见的致盲性眼病,其病理基础是视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）及其神经纤维的丧失。多种因素与其发病有关,其中病理性高眼压可以造成视网膜的缺血缺氧性损伤并导致RGCs最终以凋亡的形式丢失。本实验利用升高眼内压的方法建立急性高眼压动物模型,研究急性高眼压大鼠视网膜中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达,给予腹腔注射重组人促红细胞生成素（recombinate human erythropoietin,rhEPO）治疗及生理盐水对照,观察rhEPO对急性高眼压后视网膜中HIF-1α表达的影响及视网膜神经节细胞凋亡阳性细胞计数。探讨rhEPO是否通过影响急性高眼压视网膜中HIF1-α的表达保护视神经。方法:1.实验动物及分组:将39只成年健康SD大鼠随机分为四组:（1）正常对照组（6只眼）仅行前房穿刺不升高眼压;（2）实验组:按照高眼压后不同时间段分为再灌注12、24、48和72小时组,每组各6只眼,;（3）治疗A组:每组各6只眼,时间段分组同实验组,均于高眼压后给予腹腔注射rhEPO 5000IU/kg;（4）治疗B组:每组各6只眼,时间段分组同实验组,均于高眼压后给予腹腔注射生理盐水1ml。2.模型建立:采用前房灌注升高眼内压的方法建立急性高眼压动物模型。散瞳后观察眼底视网膜血管断流,色苍白为模型建立成功。各组分别在模型建立成功后相应时间点摘除动物眼球,制成石蜡切片。3.病理组织学观察:切片经HE染色,在光镜下观察视网膜组织的病理变化。4.免疫组化方法检测HIF-1α的表达:光镜下观察,细胞浆呈棕黄色者为阳性,应用多功能真彩色病理图像分析系统（4.0版）对HIF-1α的着色强度进行分析。5.TUNEL法检测凋亡细胞:光镜下观察神经节细胞层中阳性细胞（胞核为棕色者为阳性凋亡细胞）,每张切片随机选取4个视野,以阳性RGCs数与所测视野中神经节细胞层长度的比值作为TUNEL标记的凋亡细胞指数。6.视功能的评定:通过闪光VEP评定视神经损伤情况。结果:1.视网膜病理组织学改变:实验组大鼠视网膜在急性高眼压后12h,出现内核层轻度变薄;24h后RGCs数目减少,内核层细胞排列紊乱;72h后视网膜内层明显变薄。治疗A组与实验组对比RGCs空泡变性及核固缩现象较少,RGCs数目也多于实验组。治疗B组与实验组无明显差异。2. HIF-1α阳性表达情况:HIF-1α在视网膜内层均有阳性表达,外核层表达较少。正常对照组棕黄色着色极浅,实验组12h:视网膜内层着色较浅,24h:着色最深,72h:着色较前明显变浅,各时间段平均灰度值与对照组相比减小,其差异有统计学意义（P<0.01）;治疗A组HIF-1α着色强度的变化趋势同实验组,但各时间段的平均灰度值均较实验组明显增大,差异有统计学意义（P<0.01）,与正常对照组相比稍减小,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗B组的变化趋势同实验组,各时间段平均灰度值与正常对照组相比减小,且有显著性差异（P<0.01）,与实验组相比差异无统计学意义（P>0.05）,与治疗A组相比减小,且有显著性差异（P<0.01）。3.TUNEL阳性细胞表达情况:正常视网膜组织未见凋亡细胞;实验组在高眼压后12h,神经节细胞层及内核层可见凋亡阳性细胞,24h时凋亡数目达到峰值,48h时阳性细胞开始减少,72h明显减少;治疗A组凋亡细胞的表达趋势与实验组基本一致,但各时间段RGCs凋亡指数均较实验组明显减小,差异有统计学意义（P<0.01）;治疗B组凋亡指数与同时间段实验组相比,差异均无统计学意义（P>0.05）,与治疗A组相比,各时间段的凋亡指数均较高,且差异有统计意义（P<0.01）。4.VEP检测:再灌注24h后,实验组与正常组对照P波潜伏期延长,差异有统计学意义（P<0.01）;治疗A组与实验组对比P波潜伏期短,差异有统计学意义（P<0.01）,与治疗B组相比差异有统计学意义（P<0.05）;治疗B组与实验组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.利用前房灌注生理盐水升高眼内压的方法可以成功建立鼠的急性高眼压模型;此模型可诱导视网膜内层细胞的损伤。2.急性高眼压可以诱导视网膜中HIF-1α的阳性表达,并且可能是导致视网膜损伤的原因之一;3.急性高眼压可以诱导视网膜损伤,视网膜神经节细胞以凋亡形式丧失;4.腹腔注射rhEPO可以抑制HIF-1α的表达、降低TUNEL的阳性表达,减少急性高眼压导致的视功能丢失,有可能成为一种新的视神经保护因子。
论文目录
相关论文文献
标签：急性高眼压论文; 视网膜神经节细胞论文; 缺氧诱导因子论文; 细胞凋亡论文; 大鼠论文;