论文摘要
尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是由人类乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染引起的一种常见的性传播疾病（sexually transmitted disease，STD），发病率居性传播疾病第二位，并逐年升高。HPV是一种嗜上皮细胞的DNA病毒，广泛感染皮肤、生殖道、呼吸道、消化道上皮组织，与人类多种良恶性肿瘤密切相关。CA临床多表现为生殖器部位菜花状或乳头状增生物，虽是一种良性增生性疾病，但具有增生快、传染性强、易于复发的特点，部分有转化为恶性肿瘤的可能。不仅严重影响患者身心健康，而且对社会和家庭造成极大危害。新生血管的生成与肿瘤关系密切已得到众多研究证实，在实体肿瘤中，如果没有微血管的发生，肿瘤仅可通过扩散缓慢生长到1～2mm3，只有在新生血管形成以后，肿瘤才能迅速长大。CA是HPV病毒感染引起的良性增生物，其发生发展可能与血管生成关系密切，研究血管生成与CA的关系将具有重要的意义。判断血管生成的可靠指标是测量微血管密度（microvessel density，MVD），CD34是血管内皮细胞的特异性标志物，用以显示肿瘤间质的微血管。血管生成是各种细胞因子共同作用的结果。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是目前已知的最强有力的血管生成因子，它直接作用于血管内皮细胞，刺激内皮细胞的分裂和增殖，诱导肿瘤血管生成。缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）是肿瘤缺氧状态下血管生成的核心调控因子，通过影响其他血管生长因子的表达，而参与血管生成的全过程。血管形成的另一重要步骤是降解细胞外基质，基质金属蛋白酶（matrix metalloprotemase，MMP）是具有降解细胞外基质（extracellular matrix,ECM）功能的一组锌依赖性内切酶，MMP-9在调节ECM的代谢、影响新生血管的形成过程中作用尤为突出。目前HIF-1α、MMP-9在肿瘤组织中的作用研究较多，但HIF-1α、MMP-9与CA中MVD的关系国内外尚未见报道，HIF-1α、MMP-9与VEGF在CA组织中的相互关系也未见报道。本研究应用免疫组化SP法检测35例CA组织和15例正常人包皮组织中VEGF、HIF-1α、MMP-9及CD34的表达，并探讨它们在CA血管生成中的可能作用及相互关系。材料与方法1．材料CA标本35例，取材于郑州大学第一附属医院皮肤性病科，其中男23例，女12例；年龄19～62岁，平均30.8岁；病程20～140天，平均52.6天。临床表现典型，病理诊断明确，原位杂交证实为HPV感染，符合CA临床实验室诊断标准。另取15例经组织病理学证实的泌尿外科手术切除正常成年男性包皮组织作为对照组。2．方法应用免疫组化SP法对CA组织和正常人包皮组织中VEGF、HIF-1α、MMP-9蛋白的表达进行检测，抗CD34单克隆抗体标记MVD。HIF-1α、MMP-9和VEGF表达综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理。染色强度按着色强弱但明显强于阴性对照者为1分，染色清晰者为2分，染色强者为3分；阳性细胞占总细胞数的10％～50％者为2分，51％～80％者为3分，＞80％者为4分。上述两相评分相加，只要阳性细胞数＜10％者为（一）；弱阳性表达（+）：3分；阳性表达（++）：4～5分；强阳性表达（+++）：6～7分。MVD值取微血管密集的部位，高倍镜（×200）5个视野平均值。3．统计学处理将所有数据经SPSS11.0软件进行统计处理。计量资料采用均数±标准差表示（（?）±S），用t检验；计数资料采用x2检验；两变量间的相关性采用非参系统中的Spearman等级相关进行分析。显著性水准α=0.05。结果1．CD34在CA组织和正常包皮组织中的表达CA组与正常对照组相比真皮微血管明显增多且有管腔扩张。CA组织的MVD值（42.52±5.60）明显高于正常对照组（26.36±6.60），二者差异有显著性（t=13.361，P＜0.01）。2．VEGF在CA组织和正常包皮组织中的表达35例CA组织均表达VEGF，阳性率100％（35／35），表达强度多在（++～+++），15例正常包皮对照组织中均表达VEGF，阳性率100％（15／15）。VEGF在CA组织除角质层外的表皮全层细胞均有强表达，正常组织中仅有弱的表达，且主要在基底层表达。正常包皮组织表达强度多在（+～++）；CA组织与正常对照组VEGF阳性表达率差异无显著性，但两组阳性表达强度比较差异有统计学意义（x2=17.388，P＜0.01）。3．HIF-1α在CA组织和正常包皮组织中的表达35例CA组织中HIF-1α阳性表达33例，占94.3％（33／35），表达强度多在（++～+++），正常对照组阳性表达率66.7％（10／15），表达强度多在（-～+）；CA组织与正常对照组阳性率及阳性表达强度差异均有统计学意义（P＜0.01）。4．MMP-9在CA组织和正常包皮组织中的表达35例CA组织均表达MMP-9，阳性率100％（35／35），表达强度多在（++～+++），正常组织中阳性率86.7％（13／15），表达强度多在（+～++）；CA组织与正常对照组阳性率比较无统计学意义（x2=2.009，P＞0.05），但两组阳性表达强度差异有统计学意义（x2=21.805，P＜0.01）。5．CA组织中VEGF、HIF-1α及MMP-9表达与MVD值之间的表达情况及相关性分析CA组织中VEGF、HIF-1α、MMP-9的表达均与MVD值成正相关，且随着表达强度的增强MVD值亦随之增加。（r=0.895，0.748，0.835，P＜0.01）。6．CA组织中VEGF表达与HIF-1α、MMP-9表达之间的相关性分析CA组织中VEGF与HIF-1α及MMP-9阳性表达强度比较分别呈正相关，（r=0.828，0.748，P＜0.01），HIF-1α与MMP-9表达强度也具有相关性，（r=0.664，P＜0.01）。结论1．VEGF、HIF-1α、MMP-9在CA组织中的表达强度均高于对照组，提示VEGF、HIF-1α、MMP-9在CA的生长过程中具有重要作用。2．VEGF、HIF-1α、MMP-9的表达强度与MVD均呈正相关，表明在CA组织中VEGF、HIF-1α、MMP-9可能通过促进血管生成，进而刺激CA的生长。3．CA组织中VEGF表达与HIF-1α表达呈正相关，提示在缺氧状态下CA组织中HIF-1α表达上调可能通过激活VEGF等多种基因的转录活性，促进VEGF的表达，从而参与新生血管生成。4．MMP-9与HIF-1α和VEGF在CA组织中的表达均呈正相关，提示三者在CA组织生长和血管生成中可能具有协同作用。