论文摘要
【目的】通过腺病毒载体介导转录因子T-bet在培养的鼻黏膜上皮细胞中表达,研究其对上皮细胞分泌细胞因子的影响,以期实现变应性鼻炎的Th2偏移的调控,为探索变应性鼻炎的基因治疗奠定实验基础。【方法】通过RT-PCR方法从正常人PBMC中获得人T-bet基因序列;利用AdMaxTM系统构建携带T-bet序列的rAdT-bet;利用重组的腺病毒载体将T-bet基因导入体外培养的鼻黏膜上皮细胞; RT-PCR方法检测转导后鼻黏膜上皮细胞T-bet mRNA水平, Western Blot检测T-bet蛋白水平;ELISA方法检测培养上清中IL-15、IL-4和IFNγ的含量;应用RT-PCR方法检测经IL-15、IL-4和IFNγ刺激鼻黏膜上皮细胞后T-bet mRNA水平。【结果】获得T-bet全长基因序列,重组包装了携带目的片断的腺病毒rAdT-bet;转导体外培养的鼻黏膜上皮细胞,以rAdGFP监测转导效率达90%。rAdT-bet转导后鼻黏膜上皮细胞T-bet mRNA和蛋白水平均显著增高,具有统计学意义;转导后培养上清中IL-15水平显著增高,而IL-4和IFNγ无变化;IL-15刺激鼻黏膜上皮细胞后,检测到T-bet mRNA水平显著增高,IL-4和IFNγ刺激组则无变化。【结论】本文证实,鼻黏膜上皮细胞在参与黏膜局部免疫过程中,通过Th1特异性转录因子T-bet对IL-15的正反馈调节,可以增强Th1反应。这一发现对变应性鼻炎的治疗提出了一个新的思路,以其作为治疗靶点的研究将具有潜在的临床意义;通过腺病毒载体介导T-bet基因转导后表达,可促进鼻黏膜上皮细胞IL-15的合成分泌增加,但没有IFNγ的分泌,同时以IFNγ刺激培养细胞,T-bet基因转录水平没有变化,说明转录因子T-bet在上皮细胞内的表达及其对细胞因子分泌的作用机制与淋巴细胞不同;T-bet在鼻黏膜上皮细胞内异位表达后,没有对IL-4的抑制作用;重组腺病毒载体是鼻黏膜上皮细胞方便、高效的表达载体。
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