SARS-CoV 3a蛋白的结构与功能初步研究

论文摘要

SARS是一种严重的呼吸道传染疾病，由其病原体SARS-CoV引起。SARS-CoV 3a为一个结构蛋白，其主要定位于高尔基体且可与SARS-CoV M蛋白共定位。在此我们发现瞬时表达的3a可明显抑制细胞增殖，阻止BrdU掺入，提示3a可能起到抑制细胞周期进程的作用。细胞周期分析结果显示在HEK 293细胞中转染24-60小时后3a的表达能引起细胞G1期阻滞，且转染COS-7和Vero细胞也可观察到相似结果。为了探索3a中其影响细胞周期阻滞的结构域，我们构建了3a基因的系列缺失突变体。分析发现3a蛋白C末端（176aa～274aa）对于细胞周期阻滞是必要的，其中包括一个潜在的钙ATP酶的模序。拓扑异构性分析表明3a蛋白主要定位于高尔基体且N端朝内腔，C端朝胞浆。最后，我们进一步探索3a引起细胞G0／G1期阻滞的机制。对影响细胞周期的蛋白因子进行分析，我们证明了3a的表达可显著降低cyclin D3表达水平，明显抑制细胞内Rb Ser795和Ser809／811的磷酸化，而对cyclin D1，cyclin D2，cdk4和cdk6的表达没有明显影响。并且cyclin D3表达以及Rb磷酸化水平的降低在SARS-CoV感染的Vero细胞中也得到进一步的证实。综上所述，这些结果表明3a蛋白可能通过限制cyclin D3的表达来抑制Rb的磷酸化，从而诱导细胞G0／G1期阻滞，最终抑制细胞增殖。进而可能在SARS-CoV致病机制中起着重要的作用。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 SARS-CoV 3a蛋白在细胞中的表达及定位特征
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 小结
• 第二部分、SARS-CoV 3a蛋白可诱导转染细胞G1期阻滞
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 小结
• 第三部分、SARS-CoV 3a蛋白结构与功能关系的研究
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 小结
• 第四部分、SARS-CoV 3a蛋白通过cyclinD3/pR途径诱导细胞G1期阻滞
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 小结
• 讨论
• 参考文献
• 总结
• 附录1 英文缩略词表
• 附录2 溶液的配制
• 致谢
• SARS冠状病毒基因组编码病毒蛋白的研究进展
• 硕士期间发表论文