奶粉中奇异变形杆菌检测方法的研究

论文摘要

目的：研究建立奶粉中奇异变形杆菌的常规检测方法、PCR检测方法，并对鲜奶和市售的奶粉中奇异变形杆菌的污染情况进行调查，获取风险评估的基础数据。方法和结果：第一，利用奇异变形杆菌对选择性增菌培养基、选择性分离培养基进行筛选，最后根据其生化反应特征，建立常规检测方法程序。第二，根据奇异变形杆菌抗亚碲酸盐基因的保守序列设计引物Q248，选择合适的反应体系和条件，研究PCR方法的特异性和敏感度，并进行了扩增产物的测序。结果显示，该PCR方法具有良好特异性，与普通变形杆菌以及其他肠杆菌科细菌无非特异性扩增，对人工布菌的奶粉样品检测敏感度达1．7×10~2cfu／100g。第三，利用建立的奇异变形杆菌检测方法，对161份市售奶粉和55份鲜奶进行奇异变形杆菌检测，结果奶粉中未检出奇异变形杆菌，而有4份鲜奶检出奇异变形杆菌。调查结果表明原料奶容易受到奇异变形杆菌的污染，而奶粉中未检出，说明目前奶粉的生产工艺对奇异变形杆菌能予以很好的控制。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 奇异变形杆菌简介
• 1.1.1 病原学特征
• 1.1.2 流行病学
• 1.1.3 致病机理
• 1.2 细菌检测鉴定方法的研究进展
• 1.2.1 微生物检验的发展历史
• 1.2.2 病原细菌的检测方法研究进展
• 1.3 奇异变形杆菌检测方法的研究现状
• 1.4 研究的目的和意义
• 第二章 奶粉中奇异变形杆菌常规检测方法的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 菌种的确认
• 2.1.2.2 选择性增菌培养基的确定
• 2.1.2.3 选择性分离培养基的确定
• 2.1.2.4 快速初筛生化反应培养基的确定
• 2.1.2.5 奇异变形杆菌的最终鉴定
• 2.1.2.6 模拟污染样品的检测
• 2.1.2.7 鲜乳样品的检测
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 菌种确认结果
• 2.2.2 三种增菌培养基效能的实验观察结果
• 2.2.3 四种肠道菌分离培养基效能的实验观察结果
• 2.2.4 模拟污染样品的检测结果
• 2.2.5 鲜乳样品的检测结果
• 2.3 结论与讨论
• 2.3.1 确定GN增菌液为变形杆菌的选择性增菌培养基
• 2.3.2 确定SS琼脂为奇异变形杆菌的分离培养基
• 2.3.3 确定三项快速筛选生化反应指标
• 2.3.4 确立的奶粉中变形杆菌的常规检测方法检验程序
• 第三章 奶粉中奇异变形杆菌PCR检测方法的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 供试菌种
• 3.1.1.2 培养基及试剂
• 3.1.1.3 实验仪器
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 试验菌的培养
• 3.1.2.2 目标菌的分离与培养
• 3.1.2.3 奇异变形杆菌计数
• 3.1.2.4 细菌DNA的制备
• 3.1.2.5 奇异变形杆菌PCR检测引物的设计
• 3.1.2.6 PCR反应体系和条件
• 3.1.2.7 PCR特异性试验
• 3.1.2.8 PCR方法对人工布菌样品的检测敏感度试验
• 3.1.2.9 扩增产物的检测
• 3.1.2.10 扩增产物的确证
• 3.1.2.11 PCR方法的对鲜奶样品的检测
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 PCR的特异性分析
• 3.2.2 PCR的灵敏度试验结果
• 3.2.3 PCR特异性扩增产物序列测定结果
• 3.2.4 PCR特异性扩增产物序列的同源比较
• 3.2.5 PCR方法对鲜奶样品的检测结果
• 3.3 结论与讨论
• 第四章 奶粉中奇异变形杆菌检测方法的应用
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 试样
• 4.1.2 主要试剂和仪器
• 4.1.3 方法
• 4.2 结果与讨论
• 第五章 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况