河蚌多糖对罗非鱼肠道黏膜免疫和菌群的影响

论文摘要

本文以罗非鱼的肠道为研究对象,选用体长10cm左右、初体重（75.0±5.0）g健康罗非鱼,随机分成4组,每组20尾,分别在每公斤基础饲料中添加0.05%、0.1%、0.15%的河蚌多糖,饲喂一个月,研究河蚌多糖对罗非鱼肠道黏膜形态和肠道相关免疫细胞的影响、河蚌多糖对肠道溶菌酶活性的影响和河蚌多糖对罗非鱼肠道微生态的影响,旨在探讨河蚌多糖对罗非鱼肠道黏膜免疫的作用。本论文分三个试验进行。试验一:研究河蚌多糖对罗非鱼肠黏膜结构和肠道相关免疫细胞的影响。试验采用传统的制作组织学切片的方法,应用显微镜进行观察。采用HE染色法检测罗非鱼肠绒毛形态变化。结果表明:添加0.05%河蚌多糖组的前肠肠绒毛长度显著长于对照组的前肠肠绒毛长度,添加0.1%河蚌多糖组的前肠肠绒毛长度与对照组相比增加了29.61%,差异极显著（P<0.01）。对于中肠和后肠来说,添加了0.1%河蚌多糖的试验组,肠绒毛长度分别较对照组都有显著的增长（P<0.05）;罗非鱼的肠绒毛宽度的变化相对于对照组来说差异不明显;在前肠部位,添加0.1%河蚌多糖的试验组肌层厚度与对照组相比,显著增加了18.83%（P<0.05）。后肠部位,添加不同剂量的多糖组和对照组相比,肌层厚度均有不同程度的增厚。采用阿利新兰醋酸染色检测罗非鱼前肠、中肠、后肠杯状细胞的数量变化,探讨不同浓度的河蚌多糖对罗非鱼肠道内杯状细胞数量的影响。结果表明:添加0.05%和0.1%的河蚌多糖对罗非鱼的前肠和中肠的杯状细胞都有显著的影响（P<0.01）。采用奥新兰-沙黄染色法检测罗非鱼前肠、中肠和后肠肥大细胞数量变化,探讨不同水平的河蚌多糖对罗非鱼肠道内肥大细胞数量的影响。结果显示:不同水平的河蚌多糖对罗非鱼肠道肥大细胞数量的影响不大,但有增加的趋势。采用HE染色法检测罗非鱼前肠、中肠、后肠中肠上皮内淋巴细胞数量变化,探讨不同水平的河蚌多糖对罗非鱼肠道内淋巴细胞的数量的影响。结果表明:添加0.05%多糖组和添加0.1%多糖组对前肠和中肠的对照组来说,肠道上皮内淋巴细胞数量都有显著的增加。试验二:研究河蚌多糖对罗非鱼肠道中溶菌酶的影响。饲喂结束后,每池取4尾鱼。无菌解剖,取出相应的鱼的肠道组织,然后根据溶菌酶试剂盒的方法操作检测罗非鱼前肠、中肠、后肠中溶菌酶的活性。结果表明,在饲料中添加0.1%的河蚌多糖能显著增加罗非鱼前肠和中肠中溶菌酶的活性。试验三:研究河蚌多糖对罗非鱼肠道微生态的影响。采用非培养法,直接提取肠道内细菌的总DNA,然后采用16s rDNA的PCR-DGGE的技术对罗非鱼肠道内优势菌群进行分析。结果表明:添加0.1%和0.15%的河蚌多糖组能增加罗非鱼肠道的有益菌的含量,降低有害菌的含量,从而改善罗非鱼肠道菌群。综上表明:在罗非鱼日粮中添加河蚌多糖,能改善罗非鱼肠道黏膜形态结构,增加肠黏膜相关免疫细胞数量,提高肠道中溶菌酶的活性,改善肠道菌群,从而增强肠道黏膜免疫。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 鱼类的免疫
• 1.1 鱼类免疫器官和组织
• 1.2 免疫细胞
• 1.3 体液免疫因子
• 1.4 鱼类的免疫应答
• 2 肠道黏膜免疫系统
• 2.1 肠道黏膜免疫系统的作用
• 3 鱼类黏膜免疫的研究
• 3.1 鱼类的肠道
• 3.2 鱼类黏膜免疫系统的非特异性免疫
• 3.3 鱼类黏膜免疫系统的特异性免疫
• 4 鱼类肠道菌群的研究
• 4.1 鱼类肠道菌群的数量和组成
• 4.3 鱼类肠道正常菌群的生理功能
• 4.4 鱼类肠道微生物区系的调控
• 5 16S rDNA 的PCR-DGGE 技术
• 5.1 16S rDNA 的DGGE 技术的来源和发展
• 5.2 DGGE 技术的优点
• 5.3 DGGE 技术的应用
• 6 多糖的研究
• 6.1 多糖的免疫调节作用
• 6.2 多糖对胃肠道的影响
• 7 本课题研究的目的、意义及主要内容
• 7.1 目的和意义
• 7.2 主要内容
• 第二章 河蚌多糖对罗非鱼肠道黏膜结构及相关免疫细胞的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验设计
• 1.2 试验饲料配方
• 1.3 饲养管理
• 1.4 染色液和固定液的配制
• 1.5 操作步骤和检测指标
• 2 结果与分析
• 2.1 数据处理
• 2.2 河蚌多糖对罗非鱼肠道黏膜形态的影响
• 2.3 河蚌多糖对罗非鱼肠道内免疫相关细胞的影响
• 2.4 讨论
• 第三章 河蚌多糖对肠道溶菌酶的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药品
• 1.2 试验动物
• 1.3 主要仪器
• 1.4 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 河蚌多糖对罗非鱼肠道溶菌酶活性的影响
• 2.2 讨论
• 第四章 河蚌多糖对罗非鱼肠道菌群的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验所需药品及其制备方法
• 1.2 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 罗非鱼肠道细菌总DNA 的提取
• 2.2 肠道细菌总DNA 的琼脂糖电泳
• 2.3 16S rDNA V3 区片段的PCR 扩增
• 2.4 DGGE 变性梯度凝胶电泳
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 本研究的创新点
• 有待于进一步研究的问题
• 缩略词表
• 参考文献
• 致谢