一、Effect of implantation of skin Cell group on healing and function recovery of wound surface after deep degree burn（论文文献综述）
王晓[1]（2019）在《胎儿真皮间充质干细胞外泌体促进皮肤创面愈合的机制研究》文中认为间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）具有强大的自我更新能力和多向分化潜能,在再生医学领域具有广阔的发展前景。目前,骨髓MSCs、脂肪MSCs和脐带MSCs的功能及作用机制得到了较为广泛的研究,并且已逐步应用到了临床。同成人MSCs相比,胎儿的MSCs具有以下特点:不仅增殖能力更高、多向分化潜能更强,而且免疫原性更低。这些优势使得胎儿MSCs引起广泛的关注。胎儿真皮MSCs（Fetal dermal MSCs,FDMSCs）提取自孕中期胎儿真皮组织,是介导胎儿皮肤无瘢痕愈合最主要的细胞,在皮肤组织的修复再生领域具有潜在的优势。近年来,MSCs的旁分泌作用引起了学者们的广泛关注和深入研究,许多研究成果和临床数据表明MSCs主要通过旁分泌机制发挥作用。通过旁分泌作用,MSCs向细胞外释放生长因子、细胞因子、炎性介质、外泌体等一系列生物活性物质。其中,外泌体介导的信号传递是MSCs发挥作用的主要机制之一。外泌体是直径30-150nm的圆形小囊泡,携带多种生物活性物质,一般包括蛋白质、核酸、脂质,由脂质双分子层包裹,被细胞分泌至细胞外基质中,通过向靶细胞传递这些物质介导细胞间的通讯。外泌体通过改变靶细胞的蛋白质和基因表达,调控细胞增殖、细胞侵袭、血管生成、免疫反应等过程,参与机体的各种生理病理过程。外泌体还可作为疾病的特异性生物标志物,用于多种疾病的诊断、作为运输载体靶向传递药物。在组织修复过程中,MSCs来源的外泌体发挥着同MSCs相似的作用:促进修复、促进内源性再生、促进血管生成、调节免疫反应等。然而MSCs的外泌体促进皮肤创面愈合的具体分子机制还不清楚,亟待进一步探究。我们推测,外泌体作为FDMSCs发挥其修复作用的重要媒介,能够促进皮肤创面愈合。为了验证这一假说,我们提取了 FDMSCs的外泌体（FDMSC-derived exosome,FDMSC-Ex）并将其应用于小鼠皮肤损伤模型,发现FDMSC-Ex能够显着加快小鼠创面的愈合速度;为了进一步探究FDMSC-Ex促进创面愈合的分子机制,我们将FDMSC-Ex应用于成人真皮成纤维细胞（Adult dermal fibroblasts,ADFs）,检测ADFs的增殖、迁移、合成细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的能力及相应信号通路的改变。FDMSC-Ex孵育后,ADFs的增殖、迁移和ECM蛋白合成能力增强,同时发现Notch通路被激活;应用抑制剂DAPT阻断Notch通路后,ADFs的增殖和迁移能力显着下降。为了进一步探索Notch通路激活的原因,我们检测了 FDMSC-Ex中Notch通路5种配体蛋白（Jagged 1、Jagged 2、Dll-1、Dll-3、D11-4）的表达情况,发现FDMSC-Ex中只表达Jagged 1而不表达其他四种配体蛋白。为了验证Jagged 1在FDMSC-Ex介导的促进愈合功能中的作用,使用Jagged 1多肽模拟Jagged 1对Notch通路的激活作用,使用siRNA敲除Jagged 1在FDMSC-Ex中的表达,结果证实,Jagged 1是FDMSC-Ex激活ADFs Notch通路的关键因子,介导FDMSC-Ex发挥促进愈合的作用,由此阐明FDMSC-Ex促进皮肤组织创面愈合的分子机制。本研究探索了 FDMSC-Ex促进创面愈合的分子机制,分析MSCs外泌体的临床应用前景,为今后FDMSC-Ex用于临床难愈性创面、大面积烧伤、皮肤缺损等创面的治疗提供了理论基础。研究目的提取FDMSC-Ex,研究FDMSC-Ex对皮肤创面愈合和ADFs功能的影响,阐明FDMSC-Ex促进皮肤创面愈合作用的分子机制。研究方法1.提取FDMSC-Ex。从人胎儿皮肤组织提取FDMSCs并进行多向分化潜能、细胞表面标记物的检测;从FDMSCs的条件培养基中提取FDMSC-Ex,通过透射电镜观察形态并测量直径、通过Western blot检测其标记物（Tsgl01、Alix和CD63）、并进行了外泌体粒径分析。2.动物实验。构建小鼠背部10mm×10mm皮肤全层创面模型,术后即刻在创面周围分4个点共注射200μl 1mg/ml的FDMSC-Ex。分别于术后第7、14天观察皮肤创面愈合情况,拍照,并取创周皮肤标本进行组织学检测。3.FDMSC-Ex摄取实验。使用PKH26标记FDMSC-Ex,然后将标记好的FDMSC-Ex加入ADFs中孵育24小时,DAPI染核后使用荧光显微镜观察。4.ADFs 增殖实验。将 FDMSC-Ex 按照 1 μg/ml、10μg/ml、1OOμg/ml 的浓度梯度加入ADFs中进行孵育,24小时后使用CCK-8的方法检测细胞的增殖能力。5.ADFs迁移实验。使用划痕实验和transwell实验方法,向ADFs中加入1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml的FDMSC-Ex干预细胞。孵育24小时后,显微镜下测量单层细胞机械划痕两侧的宽度（划痕实验）;transwell实验则在细胞固定、结晶紫染色后去除小室内层细胞后,计数穿过小室膜到达小室外侧的细胞数目,检测ADFs的迁移能力。6.ADFs合成ECM蛋白能力的检测。使用RT-PCR检测FDMSC-Ex孵育后ADFs合成ECM蛋白（Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、弹性蛋白、纤维粘连蛋白、α-平滑肌肌动蛋白）的能力。7.Notch信号通路的检测。使用Western blot检测Notch通路中活性Notchl、Jagged 1和下游蛋白Hes 1的表达量改变;为了进一步验证Notch通路的作用,使用抑制剂DAPT阻断Notch通路后,再次检测ADFs的增殖和迁移。检测FDMSC-Ex中Notch通路配体蛋白表达情况,分析引起Notch通路活性改变的原因。8.Jagged 1作用的检测。使用Jagged 1多肽模拟Jagged 1对Notch通路的激活作用,使用siRNA敲除Jagged 1在FDMSC-Ex中的表达,检测Jagged 1在Notch通路激活和FDMSC-Ex促进创面愈合中的作用。研究结果1.成功提取并鉴定FDMSC-Ex。2.FDMSC-Ex促进小鼠背部皮肤创面愈合。3.FDMSC-Ex 能被 ADFs 摄取。4.FDMSC-Ex增强ADFs的增殖、迁移、合成ECM的能力。5.FDMSC-Ex通过激活Notch信号通路提高ADFs促进创面愈合的能力。阻断Notch通路后,ADFs的增殖与迁移能力显着降低。6.FDMSC-Ex中的Jagged 1蛋白激活Notch通路促进创面愈合。结论1.FDMSC-Ex促进小鼠背部皮肤创面愈合。2.FDMSC-Ex增强ADFs的增殖、迁移、合成ECM的能力。3.FDMSC-Ex通过激活Notch信号通路提高ADFs创面愈合的能力。阻断Notch通路后,FDMSC-Ex促进ADFs增殖与迁移的能力显着降低。4.FDMSC-Ex中的Jagged 1蛋白能够激活Notch通路,提高ADFs的增殖、迁移能力,在促进创面愈合中起到重要作用。
崔泽龙[2]（2019）在《烧伤瘢痕表皮结合组织工程真皮治疗瘢痕的临床研究》文中研究表明研究目的和背景:通过对我院烧伤瘢痕整形病例分别应用脱细胞异体真皮（acellular dermal matrix,ADM北京桀亚莱福生物技术有限责任公司）、植入式人工真皮（皮耐克Pelnac?:Gunze Limited,Japan）)两种组织工程真皮联合瘢痕表皮移植与传统的自体中厚皮移植进行疗效比较,探讨大面积烧伤瘢痕患者整形修复中利用组织工程真皮联合瘢痕表皮移植取代自体中厚皮移植的可行性及有效性,为临床大面积烧伤瘢痕患者整形提供可靠的皮肤移植来源。研究方法:收集2016年9月至2018年9月到我院治疗的烧伤瘢痕患者90例,以随机数字表法随机分为三组,分别为脱细胞异体真皮联合瘢痕表皮移植治疗组（A组）、植入式人工真皮联合瘢痕表皮移植治疗组（B组）、自体中厚皮片移植治疗组（C组）,每组患者30例。半年后对每组患者进行随访,比较三组患者的创面愈合时间;采用温哥华瘢痕量表（Vancouver scar scale,VSS）对比评价瘢痕情况;参照ADL分级标准评定患者关节功能;同时切取组织进行病理活检,对比观察瘢痕形态学改变。研究结果:1.创面愈合时间:A组（12.07±2.01）天,B组（22.23±1.76）天,C组（11.33±2.05）天。A、B组和B、C组组间差异有统计学意义（p<0.01）;A、C组组间差异无统计学意义（p>0.05）。B组患者创面愈合时间较A、C组长;2.随访时瘢痕VSS评分:A组（4.10±1.67）分,B组（4.40±1.94）分,C组（5.07±2.35）分。各组间瘢痕情况评分差异均无统计学意义（p>0.05）。分别比较三组患者入院时以及随访时瘢痕VSS评分结果,均显示p<0.05,差异均有统计学意义;3.随访时ADL关节功能评定:A组（优5例,良12例,中10例,差3例）,B组（优4例,良11例,中10例,差5例）,C组（优7例,良14例,中6例,差3例）。各组间ADL关节功能评定结果差异均无统计学意义（p>0.05）。分别比较三组患者入院时以及随访时ADL关节功能评定结果,均显示p<0.05,差异均有统计学意义;4.瘢痕组织病理活检:A组10例,B组9例,C组10例,三组标本组织学形态相似:均显示真皮层炎细胞消失,血管减少,胶原纤维轻至中度增生,均未形成瘢痕疙瘩。研究结论及意义:1.植入式人工真皮（皮耐克）联合瘢痕表皮移植组创面愈合时间较长,脱细胞异体真皮联合瘢痕表皮移植和自体中厚皮移植两种治疗方法创面愈合时间无明显差异;2.三种方法对于瘢痕修复及关节功能恢复均有显着疗效,各组间疗效无显着差异;3.对于大面积烧伤瘢痕需要整形的患者如自体中厚皮不足可选择脱细胞异体真皮联合瘢痕表皮移植或植入式人工真皮（皮耐克）联合瘢痕表皮移植治疗。组织工程真皮联合烧伤瘢痕表皮移植既可避免供皮区新的瘢痕,又可以达到和自体中厚皮同样的治疗效果。脱细胞异体真皮联合瘢痕表皮移植还可以缩短治疗周期。
吴晴晴[3]（2019）在《脱细胞猪小肠黏膜下层与脱细胞猪真皮基质作为真皮支架的对比研究》文中认为目的应用脱细胞猪小肠黏膜下层作为真皮支架与SD大鼠自体刃厚皮片进行复合移植,修复SD大鼠全层皮肤缺损,与猪脱细胞真皮基质比较,分析大鼠创面的一般情况,成活率,收缩率及组织学特性,从而为脱细胞猪小肠黏膜下层进一步行临床试验提供理论依据。方法 1实验动物分组 将36只SD大鼠用随机区组法随机分为A组（实验组）和B组（对照组）,每组18只。A组为脱细胞猪小肠黏膜与自体刃厚皮片复合移植,B组为猪脱细胞真皮基质与自体刃厚皮片复合移植。2实验大鼠全层皮肤缺损模型制作与处理（1）于背部避开脊柱做1个2.5*2.5cm的全层皮肤缺损,取下的皮片备用。（2）两组真皮支架材料与创面缝合固定,取下的皮片使用剪刀手工修剪处理成刃厚皮片,覆盖于皮肤生物补片上,缝合固定,加压包扎。3于术后2周,4周,8周,12周观察大鼠术后的一般情况,创面愈合情况,并对创面进行拍照使用Image-J图像分析软件进行分析,计算创面成活率和创面收缩率,后采用spss19.0统计学软件分析。4术后4、8、12周分别处死各组动物并进行大体解剖,将植皮区连同周围正常组织作为标本,4%多聚甲醛固定,常规石蜡切片,HE染色,显微镜观察病理学改变,包括炎性细胞浸润,上皮细胞、成纤维细胞生长、胶原排列、毛细血管结构及生物补片降解等。结果1 一般情况观察 各组动物在植皮手术后其进食、进水情况均正常,活动自如,精神状态佳。2创面情况观察 每次更换敷料时,均观察创面,结果发现两组创面均未出现异常红肿渗出及出血情况,敷料未见松脱。3创面愈合情况（1）植皮区成活情况术后2周,实验组皮片存活率（96.0±9.6）%高于对照组（87.8±18.1）%,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）植皮区收缩情况术后4周,实验组创面收缩率（26.2±16.1）%低于对照组（28.9±19.5）%,但差异无统计学意义（P>0.05）。术后8周,实验组创面收缩率（27.5±5.3）%低于对照组（33.3±20.2）%,但差异无统计学意义（P>0.05）;术后12周,实验组创面收缩率（30.3±22.0）%低于对照组（40.8±17.6）%,差异有统计学意义（p<0.05）。4组织学观察 术后4周,两组的植入材料与移植皮片融合度均很好,植入材料内及其周围均有大量的成纤维细胞和新生毛细血管长入,并有炎症细胞浸润。术后8周,两组植入材料内及其周围均有成纤维细胞和新生毛细血管长入,炎症细胞较术后4周时少。两组植入材料的原有胶原纤维结构尚清晰,出现疏松。术后12周,两组的植入材料基本被新生胶原纤维替代,新生胶原纤维排列规则有序,与表皮面基本平行,血管非常丰富。结论1本实验证明脱细胞猪小肠黏膜下层联合自体刃厚皮修复大鼠全层皮肤缺损与猪脱细胞真皮基质的皮片成活率和早期的创面收缩率无明显差异。2本实验证明脱细胞猪小肠黏膜下层联合自体刃厚皮修复大鼠全层皮肤缺损较猪脱细胞真皮基质更能改善创面后期瘢痕形成,效果较佳。3本实验所使用的脱细胞猪小肠黏膜下层进行进一步临床试验有一定的可行性。
王一惠[4]（2019）在《TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究》文中指出研究目的探究炎症因子TNF-α是否会影响小鼠间充质干细胞（MSCs）向汗腺细胞分化以及从表观遗传学角度揭示其调控机制。研究内容1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）MSCs来源广、易获取、免疫原性低和具有多向分化潜能,被认为是以干细胞为中心的细胞治疗的理想细胞来源。利用基因编辑技术、与汗腺细胞在基质胶中共培养等方法可以成功的诱导MSCs在体外获得汗腺细胞的表型,这使得未来深度烧伤患者的汗腺功能再生成为可能。为了解决MSCs体外诱导效率低、诱导周期长,同时为了避免基因编辑技术的脱靶效应、传递系统的有效性和安全性、免疫排斥反应、伦理争论以及基质胶力学性质差、不稳定、在体内被吸收过快等问题,我们利用生物打印技术在体外构建类细胞外基质模拟汗腺发生发育的微环境诱导MSCs向汗腺细胞分化。（2）微环境可以影响MSCs的功能,研究证明TNF-α、IL-6等炎症介质会抑制MSCs向骨、软骨及脂肪细胞分化。结合烧伤患者的生理病理状态,为了有效的诱导MSCs在患者创面向汗腺分化,我们在体外模拟炎症微环境并检测TNF-α对MSCs向汗腺细胞分化的影响。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）多能性调控因子Nanog不仅与胚胎干细胞、肿瘤干细胞分化潜能相关,也参与调控MSCs分化过程,研究证明敲低MSCs的Nanog会抑制其增殖以及分化潜能。为了阐明TNF-α影响MSCs向汗腺细胞分化的机制,我们检测了TNF-α对其Nanog表达的影响。（2）N6-甲基腺苷（m6A）是哺乳动物细胞中最常见的一种mRNA内部甲基化修饰,由以甲基化酶METTL3为主的甲基化酶复合物METTL3/METTLL14/WATP和去甲基化酶FTO和ALKBH5共同调控以维持其动态平衡,参与维持机体多种生理功能和病理过程。Nanog已被证明含有m6A修饰,调控Nanog mRNA的m6A水平可以影响其mRNA丰度进而决定胚胎干细胞、肿瘤干细胞的命运。基于这些研究成果以及为了阐明TNF-α调控MSCs表达Nanog的机制,我们首先探究TNF-α对MSCs总RNA m6A水平的影响以及参与调控这种变化的甲基化酶或去甲基化酶。（3）研究发现甲氯灭酸（MA）是FTO的选择性抑制剂,可与FTO竞争结合m6A修饰的核酸而提高细胞总RNA m6A水平。为了验证FTO的去甲基化作用参与调控TNF-α对MSCs Nanog表达及定向分化的影响,我们用MA的乙酯形式MA2抑制MSCs FTO的去甲基化作用并观察其对MSCs m6A水平、FTO表达、Nanog表达及向汗腺细胞分化的影响。（4）m6A修饰会加速mRNA降解而调控其表达水平。为了进一步揭示TNF-α影响下FTO的去甲基化作用如何调控Nanog表达,我们检测了TNF-α对MSCs Nanog的m6A水平和其半衰期的影响。研究方法1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）在二维培养、二维培养结合小鼠足部匀浆、以仿生材料为主要成分的类细胞外基质、以仿生材料和小鼠足部真皮匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质四种条件下诱导MSCs向汗腺细胞分化,培养14天后用RT-qPCR方法和免疫荧光方法检测各组细胞表达汗腺细胞标记物的差异。（2）利用生物打印技术构建以仿生材料和小鼠足部真皮匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质诱导MSCs向汗腺细胞分化,分别给与20ng/ml的TNF-α和空白处理,培养14天后,用RT-qPCR方法和免疫荧光方法检测各组细胞表达汗腺细胞标记物的差异。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）在2D培养条件下和3D培养条件下,分别给与MSCs 20ng/ml的TNF-α和空白处理,继续培养6小时后,RT-qPCR方法和Western blot方法检测TNF-α对MSCs表达Nanog的影响。（2）MSCs融合约80%时分别给与20ng/ml的TNF-α和空白处理,继续培养6小时后,免疫荧光检测两组MSCs总RNA的m6A修饰水平的差异。再结合RT-qPCR方法和Western blot方法检测两组细胞中甲基化酶、去甲基化酶表达的差异。（3）用MA2抑制FTO去甲基化作用来验证是否FTO的去甲基化作用在TNF-α调控MSCs分化过程中发挥重要的作用。首先结合免疫荧光方法检测MA2对MSCs总RNA m6A修饰水平的影响。其次利用RT-qPCR方法和Western blot方法检测MA2是否引起FTO在mRNA和蛋白水平的表达发生变化。然后检测了MA2对MSCs Nanog在mRNA和蛋白水平的表达的影响。最后结合RT-qPCR方法和免疫荧光方法验证MSCs在类汗腺细胞外基质中诱导14天后汗腺细胞标记物的表达差异。（4）结合MeRIP-qPCR技术检测TNF-α对MSCs Nanog mRNA的m6A修饰水平影响。其次利用放线菌素D抑制细胞RNA合成,结合RT-qPCR方法验证Nanog mRNA的m6A修饰水平对其半衰期的影响。研究结果1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）利用生物打印技术在体外构建的以仿生材料、小鼠足部匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质模拟汗腺发生发育的微环境可以诱导MSCs向汗腺细胞分化,在mRNA和蛋白水平表达汗腺细胞标记物。（2）相对与对照组,TNF-α处理组MSCs在同样条件下诱导14天后汗腺细胞标记物的表达明显受到抑制。结果表明炎症因子TNF-α不仅可以抑制MSCs向骨、软骨、脂肪细胞分化,也会抑制其向汗腺细胞分化。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）与对照组相比,TNF-α处理组MSCs Nanog的表达在mRNA和蛋白水平均被抑制,提示TNF-α通过调控Nanog表达影响MSCs分化,这与敲低MSCs的Nanog会抑制其增殖以及分化潜能的理论一致。（2）与对照组相比,MSCs接触TNF-α6小时后总RNA的m6A修饰水平显着提高,去甲基化酶FTO在mRNA和蛋白水平的表达受到抑制,但是两组间甲基化酶METTL3和去甲基化酶ALKBH5基因的表达没有显着差异。综上所述,TNF-α抑制FTO表达导致MSCs总RNA的m6A修饰水平显着提高。（3）与对照组相比,MSCs接触MA2仅6小时后总RNA的m6A修饰水平显着提高。但两组之间FTO在mRNA和蛋白水平的差异没有统计学意义,这与MA2是通过与FTO竞争结合m6A修饰位点而抑制FTO去甲基化作用的理论一致。此外,MA2在mRNA和蛋白水平抑制Nanog的表达,导致MSCs在类汗腺细胞外基质中诱导14天后汗腺细胞标记物的表达明显减少。由此可知,FTO的去甲基化作用在调控MSCs表达Nanog和分化过程中发挥着重要的作用。（4）TNF-α抑制FTO表达提高了MSCs Nanog mRNA的m6A修饰水平导致Nanog mRNA的半衰期明显缩短,这与m6A修饰会加速mRNA降解理论一致。研究结论TNF-α抑制MSCs表达去甲基化酶FTO,导致Nanog mRNA的m6A水平增加,使Nanog mRNA稳定性下降而加速降解,最终表现为MSCs的分化潜能受到抑制。我们的发现首次阐明了m6A修饰在MSCs功能中的重要性,为微环境在转录后水平调控MSCs的多能性提供了新的认识。此外,通过调节m6a修饰维持MSCs分化能力,为干细胞介导的再生医学提供了一个新的治疗靶点。
李晓庆[5]（2019）在《UC MSCs移植微环境的改变对烧伤创面愈合的影响及机制》文中研究说明[目的]通过体外实验探究通过与微粒皮共培养等改善脐带间充质干细胞（Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC MSCs）培养环境后 UC MSCs 的增殖情况,通过体内实验探究改善UC MSCs移植的微环境后对大鼠创面愈合的影响及机制,为今后临床运用UC MSCs提供理论基础。[方法]1、体外细胞实验中首先将UC MSCs与微粒皮进行体外共培养,第一组:UC MSCs组,第二组:1cm2新生SD大鼠微粒皮+UC MSCs,观察UC MSCs的形态变化,CCK8法检测脐带间充质干细胞的增殖情况。然后使用严重烧伤大鼠的血清模拟烧伤微环境,将UC MSCs、微粒皮及rhEGF进行分组共培养,第一组:10%严重烧伤大鼠血清+UC MSCs,第二组:10%严重烧伤大鼠血清+1cm2新生SD大鼠微粒皮+UC MSCs,第三组:10%严重烧伤大鼠血清+20ng/mL rhEGF+UC MSCs,第四组:10%严重烧伤大鼠血清+20ng/mL rhEGF+1cm2新生SD大鼠微粒皮+UC MSCs,观察UC MSCs、微粒皮及rhEGF之间的相互作用、相互影响,观察混合培养的细胞形态变化,CCK8检测脐带间充质干细胞的增殖情况。2、动物实验首先建立大鼠深Ⅱ°～Ⅲ°烫伤模型,伤后3d进行切痂处理,并按照以下两组分别进行处理,第一组:UC MSCs+异体网状皮组,第二组:UC MSCs+rhEGF+自体微粒皮+异体网状皮组,处理后常规包扎固定。在术后3d、7d、14d、28d通过HE染色病理检查观察大鼠创面的愈合情况,使用MPO、MAC-2免疫组织化学染色法检测创面中性粒细胞和巨噬细胞的浸润情况,使用EILSA试剂盒检测创面促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α,抗炎因子IL-4、IL-10,趋化因子SDF-1、CXCR4的表达情况。[结果]1、UC MSCs与微粒皮进行体外共培养后UC MSCs细胞数量先降低后增高,在14d时与UC MSCs组基本持平;在10%严重烧伤大鼠血清模拟的微环境当中,细胞培养的3d和7d,10%烧伤血清+UC MSCs组的细胞活力均高于其他三组,在细胞培养的14d 10%烧伤血清+微粒皮+UC MSCs组及10%烧伤血清+rhEGF+微粒皮+UC MSCs组细胞活力均明显升高,且两组之间无差异。2、第二组大鼠创面的愈合情况优于第一组大鼠创面愈合情况;从术后3d开始,表皮层结构逐渐完整,真皮层逐渐形成,炎症反应逐渐减轻,成纤维细胞逐渐增大,胶原纤维和毛细血管也逐渐形成并增多,并逐渐形成毛囊的结构,第二组的创面毛囊结构和新生血管数量均多于第一组,愈合情况较好。术后3d、14d、28d,第二组大鼠创面MPO的表达均低于第一组,术后14d、术后28d的差异具有统计学意义（P<0.05）,术后3d差异无统计学意义（P>0.05）,术后7d第二组大鼠创面MPO的表达均高于第一组,但差异无统计学意义;术后3d、7d、14d、28d,第二组大鼠创面MAC-2的表达均低于第一组,术后7d、28d差异具有统计学意义（P<0.05）,术后3d、14d差异无统计学意义（P>0.05）。ELISA检测中IL-1β在术后14d第一组表达高于第二组,两组差异有统计学意义（P<0.05）,TNF-α在术后7d第一组表达低于第二组,两组差异有统计学意义（P<0.05）,SDF-1在术后14d第一组表达高于第二组,两组差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组比较均无统计学意义（P>0.05）。[结论]1、UC MSCs与微粒皮进行体外共培养并不影响UC MSCs的增殖情况,具有共同使用的可行性;在10%烧伤血清模拟的微环境当中,10%烧伤血清+微粒皮+UC MSCs组和10%烧伤血清+rhEGF+微粒皮+UC MSCs组在共培养3d、7d时细胞活性下降,共培养14d时细胞活力明显增高。2、UC MSCs+rhEGF+自体微粒皮+异体网状皮组相较UC MSCs+异体网状皮组对大鼠创面的愈合有明显的促进作用。UC MSCs+rhEGF+自体微粒皮+异体网状皮组较UC MSCs+异体网状皮组在干细胞移植后3d、7d、14d及28d均能够显着减轻烧伤大鼠创面的中性粒细胞浸润情况和巨噬细胞浸润情况。UC-MSCs+rhEGF+自体微粒皮+异体网状皮组与UC MSCs+异体网状皮组创面促炎因子、抗炎因子和趋化因子的表达无明显差异。
吕振木[6]（2019）在《人工真皮皮耐克（Pelnac）在治疗创伤骨科复杂创面的临床与基础研究》文中认为第一部分人工真皮皮耐克（Pelnac）在治疗创伤骨科复杂创面的临床应用目的:探讨人工真皮（皮耐克愈敷料）在创伤骨科复杂创面愈合的应用,评估其对术后结果的影响。方法:该研究为前瞻性研究。从2013年3月开始,截止到2017年5月,我科共治疗足踝部皮肤软组织大面积缺损患者16例,前臂和手部皮肤软组织大面积缺损患者13例,手腕或前臂脱套伤15例,以及手部脱套伤后采用传统皮片移植术后失败后采用人工真皮皮耐克再修复1例。前三种皮肤软组织损伤创面以及脱套伤移植术后失败者再清创后的创面均伴有骨/肌腱外露。彻底清创后采用皮耐克人工真皮覆盖缝合,VSD负压封闭引流7-10天,1-2周后行自体刃厚皮片移植,严重者VSD二次负压封闭引流。脱套伤者采用一期手术（皮耐克和VSD）重建修复组织缺损。术后对皮片存活情况、外观效果、手术区神经功能恢复情况以及累及或邻近关节的功能恢复情况、患者总体满意度情况进行综合评估。结果:对于足踝部创面来说,13/16例患者移植的皮片能够完全抓附于创面,成功率为81.3%。患者对手术区外观总体满意率为76.5%,VSS伤疤评分为2.2±2.1,代表了中上等水平。超过85%的患者自认为手术区神经功能恢复接近正常。踝关节屈伸度平均为48.5±4.8°（范围:35–62°）,15例患者对踝关节功能恢复较为满意。对于前臂和手部复杂创面来说,移植的皮片完全成活率为84%,并未发现感染、血清肿、水疱等并发症;患者外观满意率为75%;VSS伤疤评分为2.9分,54%的患者认为手术区的皮肤神经功能正常或接近正常,平均的DASH得分为27.2分,大部分患者能够获得进行日常活动的能力。对于手腕或前臂脱套伤而言,人工真皮的抓附率在87-100%,患者对外观的主观满意率为72%,VSS评分为2.1,13（87%）例患者报道其神经功能恢复接近正常,平均的DASH得分为21.2,14（93%）例患者能够获得满意的日常活动能力。脱套伤采用传统方法修复失败后采用人工真皮再修复的病例报道中,该患者在最后一次随访中获得了满意的效果,包括伤疤质量、外观效果以及日常活动能力。结论:人工真皮皮耐克具有良好的组织相容性和促进创面愈合的能力,与负压封闭引流技术联合使用可大大提高临床效果,可作为创伤骨科大面积组织缺损伴骨/肌腱外露者的替代选择。第二部分无末端胶原促进体外培养的胸主动脉内皮细胞增殖、迁移及官腔形成的实验研究目的:探讨无末端胶原生物材料是否可促进体外血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成,为临床开展人工真皮皮耐克（Pelnac）治疗创伤骨科复杂创面提供理论支持。方法:实验大鼠经甲醛溶液麻醉后,在超净台无菌条件下,对大鼠暴露的胸主动脉进行解剖切除,放入预装D-Hanks液（高压灭菌）的培养皿中,将血及周围结缔组织去除后,转移到另一个盛有无菌D-Hanks液的培养皿,再次去除周围纤维结缔组织,而后轻轻剖开胸主动脉,将胸主动脉彻底剪碎至1mm×1mm大小,并均匀种植于50ml培养皿内,使得组织块保持一定间隙,继而轻轻加入4-5ml含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基,同时使培养基没过各个组织块,而后放置于CO2培养箱（37℃,5%CO2）培养5天换液,之后每2-3天更换培养基一次。经过10天的培养,原代细胞将占据培养皿面积的2/3左右,当细胞融合率达近80%时,可传到下一代。首先去除旧培养基,再用高压灭菌EDTA溶液洗涤细胞2次,加入0.25%胰蛋白酶2ml,置于倒置显微镜下观察,细胞起皱褶,然后变圆,此时加入等量的培养基终止消化,然后用吸管轻轻吸匀,1500rmp/min离心3min,弃去上清培养基,加入适量新鲜培养液,吹打混匀细胞至悬液。再培养2-3天更换培养基,然后对细胞进行增殖测定、迁移检测、成管实验和Western Blot检测。结果:无末端胶原能显着提高大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖和迁移能力。通过计算大鼠胸主动脉内皮细胞成管数,结果证实无末端胶原组管腔数（36.67±6.39）是胶原对照组（12.33±3.36）的近3倍,提示无末端胶原能显着促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖及血管形成。最后,Western blot检测结果表明,无末端胶原能增强内皮细胞中VEGF的表达。结论:无末端胶原能促进体外内皮细胞的增殖和迁移;同时无末端胶原也能促进血管形成并参与组织的修复或愈合;上述结果可能是无末端胶原通过促进内皮细胞中VEGF的表达得以实现的。
郝晨晟[7]（2018）在《Meek微型皮片植皮技术在成批烧伤救治中的临床应用》文中研究说明目的:探讨Meek微型皮片植皮技术在成批烧伤救治中的临床应用。方法:2012年2月～2015年2月,选择笔者单位收治的成批大面积深度烧伤患者64例,年龄为1～55岁,烧伤总面积为50%～95%TBSA,创面基本分布于患者的头面颈、四肢、躯干等部位。所有患者入院后经积极抗休克、输血、补液、营养支持治疗后,一般情况稳定,排除手术禁忌证,对烧伤创面切削痂植皮,其中32例患者创面进行Meek微型皮片移植,32例患者创面进行微粒皮移植,统计两组患者年龄、使用自体皮肤面积,手术时间,创面愈合时间,住院时间,计算术后7d移植皮片成活率,治疗2周创面完全愈合率,住院费用。对数据行独立样本t检验、x2检验。结果:Meek微型皮片移植能明显节省自体皮源,供皮区可以反复利用,皮片容易成活,创面愈合周期短,手术时间,住院时间缩短,节省了住院费用,降低了术中风险。结论:Meek微型皮片移植是成批救治烧伤中较为理想的皮片移植技术,提高了创面愈合率,缩短了住院天数,在临床上值得推广应用。
罗旭[8]（2018）在《激光微孔猪脱细胞真皮基质构建及移植实验》文中研究指明第一部分激光微孔猪脱细胞真皮基质（LPADM）构建这个部分采用紫外激光贯穿形成3D矩阵的材料结合化学高渗盐脱细胞、戊二醛交联等制作过程制成了激光微孔猪脱细胞真皮（LPADM）,并采用病菌学、大体、组织学及扫描电镜观察、高光谱图像智能识别分析LPADM基本特征。目的:构建激光微孔猪脱细胞真皮基质（LPADM）。方法:体质量25Kg左右健康小白猪1只,肥皂水洗刷,处死,去毛后剥取背部全层皮肤,去脂后,体积分数0.1%苯扎溴胺浸泡15min,生理盐水冲洗干净,手持电动取皮刀首先切取0.2mm厚度的刃厚皮片,去除表皮及基底膜层,然后在创面真皮组织上再切取约0.3mm厚度真皮断层皮片,分成两部分进行如下处理。（1）一部分猪真皮采用独特激光模板悬空打孔技术处理。将含有乳突层、部分网状层真皮片悬空固定在紫外激光加工设备平台上,保持皮片上下表面平整且湿润,调节设备参数为出射功率密度最小1OOOOW/mm2,微孔孔径135um,两孔间间隙lmm,经由相应孔径和孔间隙激光模板引导,在1.Ocm*1.Ocm规格区域快速击穿样品,形成100个微孔区,然后在2%NaCL、0.5%戊二醛脱去微孔化猪真皮细胞并交联,获得激光微孔猪真皮基质（LPADM）。获得的LPADM,60Co照射灭菌后制成5.0cm×5.0cm大小规格4 ℃冷藏保存。（2）另一部分猪真皮不打孔,同上脱细胞及交联制成同样规格无孔猪脱细胞真皮基质（PADM）,按同样技术手段脱细胞及交联处理,4 ℃冷藏保存。对所制备的LPADM进行大体、组织学及扫描电镜观察、高光谱指纹分析。结果:LPADM、无孔PADM均柔软、有弹性,瓷白色,组织学观察显示真皮基质内未见完整细胞成分,结构未见明显紊乱,基质内细胞较为彻底干净。LPADM除了以上形态特点,还有贯穿性圆形、均一微孔结构。组织学检查显示LPADM微孔边缘激光炭化程度轻。扫描电镜示孔径中胶原纤维排列有序。LPADM的激光微孔化处理后,光谱曲线在20波段,表现为深“V”形指纹特征,组织结构呈现很大程度的特征指纹光谱图像明显差异,提示材料本身性状存在处理前后不同。结论:LPADM是一种拥有着创新的结构和结构特性的新型脱细胞真皮基质。第二部分LPADM的体外实验本实验包含两部分内容。第一部分实验:采用LPADM-Fb共培养及早期的培养液中的多种活性细胞因子检测,验证LPADM低/无毒性,良好的细胞相容性;同时论证体外预先将LPADM转变为含有成纤维细胞的LPADM作为“活性复合材料”的必要性和合理性。第二部分实验:采用间充质来源的两种干细胞BMSCs、ADSCs分别与LPADM体外共培养,验证LPADM的多种细胞相容性和作为体外干细胞培养平台的可行性,为下一步在体试验奠定基础。目的:LPADM分别与FB、BMSC、ADSCs体外共培养,验证LPADM对以上三种细胞分别在细胞毒性、细胞相容性和细胞生物学活性方面的影响。方法:分别将FB、BMSC、ADSCs与LPADM体外六孔培养板共培养,具体分为以下五步:（1）取保存备用的LPADM与无孔PADM,制备成2.0cm×2.0cm×0.3 mm大小,分别置于6孔培养皿中,用DMEM培养基中添加体积分数10%FBS制备的Fb培养液培养;取1只SD大鼠分离培养其自体皮片中的Fb,取第3代Fb部分以1 × 105个/mL密度接种于2种ADM表面,分别为LPADM-FB组与无孔PADM-FB组。（2）40倍倒置相差显微镜下观察各组Fb生长情况。接种第1、3、5天,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定各组Fb细胞活性因子TGF-β 1、LN、VEGF、IL-6、、IL-10在492 nm波长处的吸光度值,每组每时相点6个样本,按相应试剂盒具体操作说明书进行。（3）取第3代BMSCs贴壁细胞制成细胞悬液,调整细胞浓度至I× 104个/mL,按每孔1 mL细胞悬液分别接种于2块6孔培养板,分别设3个孔为成骨组和成脂组,另分设3个孔均为阴性对照组,然后行分化鉴定。成骨组茜素红染色、成脂油红0染色,在光学显微镜下观察。（4）超净台环境中将LPADM剪成2 cm×2 cm大小放于6孔板中,微孔化真皮基质表皮面朝上。取生长良好的第三代BMSCs,胰蛋白酶消化,密度调整至4×105个/mL的细胞悬液,接种lmL的细胞悬液在六孔板LPADM的表面,放入37 ℃、5%C02饱和湿度的恒温培养箱中孵育4 h,进行第一次换液,再置于37 ℃、5%C02饱和湿度的恒温培养箱培养,每2d换液一次,体外共培养5 d。同期,重复以上操作接种一批无孔化真皮基质（PADM）。构建成BMSCs-LPADM和BMSCs-PADM两种含有BMSCs的微孔化和无孔化的真皮基质待移植材料。（5）同上,利用购买的脂肪源干细胞（ADSCs）细胞株,体外传代第三代,与ADSCs-LPADM体外共培养,观察ADSCs增殖、生长、迁移情况。结果:（1）成纤维细胞与LPADM共培养,传至第3代时,形态趋于一致,呈Fb样,生长较快;（2）接种第1、3、5天,采用双抗体夹心ABC-ELISA法在492nm波长处,测定各组Fb细胞活性因子TGF-β 1、LN、VEGF、IL-6、IL-10的吸光度值存在统计学意义（F为0.050～1.763,P>0.05）;（3）BM-MSCs细胞形态,成脂、成骨分化鉴定和BM-MSCs-BMSC-LPADM共生长特点。分离得到的单核细胞在倒置相差显微镜下呈圆形,折光性强。培养2d后可见部分细胞贴壁生长,呈梭状。培养5 d时,细胞已出现分裂增殖。培养12 d时细胞融合达80%,此时细胞呈现为Fb样。至第3代时,细胞形态趋于一致,为Fb样,细胞生长较快,每7天传代1次。成骨细胞诱导培养液培养3d,细胞密度增大,呈短梭形。培养5 d,细胞形态不一,部分细胞呈现为多角形。培养7 d,细胞间可见细小的钙质沉积。培养10 d,形成明显的钙结节;阴性对照组细胞密度增加,未见钙结节出现。茜素红染色,成骨组细胞可见散在的钙结节,高倍镜下呈深红色,阴性对照组无明显改变。成脂肪细胞诱导培养液培养3d,细胞中可见细小脂滴,部分细胞质反光增强,5 d后细胞质内出现小脂滴并逐渐融合,10 d后出现明显的脂滴,且含有脂滴的细胞变为圆形或多边形;阴性对照组细胞无显着变化。油红O染色,成脂组见大量含有红色脂滴的成脂肪细胞,阴性对照组未见明显改变。（4）脂肪源干细胞（ADSCs）-LPADM观察ADSCs细胞增殖活力强、生长以及细胞爬片。1-2天爬满12孔板基底。结论:经过脱细胞和激光连续微孔（气化）蛋白质源性材料的猪真皮组织后,体外与分别与成纤维细胞、骨髓间充质干细胞、ADSCs体外共培养,三种细胞的生物学活性表现正常,LPADM未见明显细胞毒性作用;LPADM作为真皮替代物具有良好的细胞相容性,可为终末分化细胞--成纤维细胞、间充质来源的两种干细胞（骨髓间充质干细胞、脂肪源性干细胞）体外细胞培养提供3D生物源性平台。第三部分在体LPADM移植实验本实验包括以下五个部分。第一步采用皮下埋藏实验论证组织相容性及血管化初形成能力评测;第二步采用游离的自体皮片在体移植试验,检验LPADM形成早期血管化程度;第三步连续动态采集术区HE组织学图像,高光谱分析分析LPADM光谱特征,指纹光学特性,检评其作为移植过程血管化进程的可行性及特点;第四步LPADM-BMsc在体移植,外源性的BMsc在体观察到新生分化为皮肤附件器官的现象,提示了 LPADM作为BMsc的载体及持续促进BMsc分化定向可能具有潜在作用。第五步采用另一种人源脂肪内源性干细胞在体验证LPADM的作为多种干细胞在体移植的“载体”的稳定性和普遍适用性。目的:1、在体验证LPADM的细胞、生物相容性和血管化能力和评测;2、LPADM复合含有骨髓问充质干细胞（BMsc）的大鼠骨髓间充质细胞群的对裸鼠部分皮肤附件细胞再生修复的作用;3、验证LPADM可以为间充质干细胞提供较理想的3D生物平台。方法:（1）皮下埋藏试验。验取21只大鼠,硫化钠去毛24 h后,30 g/L戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉,对称“U”型切开脊柱两侧背部全层皮肤至深筋膜,造成2.0 cm×2.0 cm大小创面,将LPADM与无孔猪ADM剪裁成相应大小分别移植于左右两侧筋膜层上,打包固定,单笼饲养。分别于术后1、3、10 d观察大鼠的体质量变化、死亡率及皮肤有无过敏、感染征象等,同时切取深筋膜下含有LPADM与无孔猪ADM标本行组织学检查。（2）自体皮片移植试验。分为自体刃厚、自体中厚皮片逐步验证其血管化临床能力。在大鼠背部造成一个2.0 cm×2.0 cm大小的“口”型创面,深筋膜表面放置LPADM,将创区全厚皮片修薄成中厚皮片同步移植于其上,缝合、打包固定,单笼饲养。分别于术后相应观测点按随机数字表法取大鼠,观察其体质量变化、死亡率及皮肤有无过敏、感染征象等,同时切取LPADM标本行组织学检查。移植皮成活标准为早期皮片色泽红润、平坦,与受皮区基底贴附紧密。（3）将（2）中1-15天内的不同时间段LPADM标本取材,制作成HE组织切片,同步进行高光谱成像观测和分析。（4）BMsc-LPADM在体移植修复和皮肤附件新生试验。将1只SD大鼠处死.取股骨和胫骨,分离培养骨来源的骨髓间充质细胞群,取第3代贴壁细胞进行成骨、成脂肪细胞分化实验。之后将其接种于LPADM、无孔PADM上,构建骨髓间充质细胞.LPADM和骨髓间充质细胞-无孔PADM。取21只健康裸鼠随机区组分为骨髓间充质细胞-LPADM+无孔猪ADM组（简称A组,6只）、LPADM+刃厚皮片组（简称B组,6只）、骨髓间充质细胞-LPADM+刃厚皮片组（简称c组,6只）、骨髓间允质细胞-无孔猪ADM+刃厚皮片组（简称D组,3只）,麻醉后在其背部正中做一 2cm×2cn,的全层皮肤缺损创面,达深筋膜,同时切取相同大小刃厚皮片备用,并分别移植相应材料覆盖创面于移植术后5、7、14 d观察裸鼠术区愈合情况及不良反应,各组分别处死1只裸鼠切取全部移植物,HE染色观察其组织结构;移植术后7、14 d透射电镜下观察相应复合物中新生皮肤附件情况。（5）LPADM+脂肪源干细胞（ADSCs）小动物活体成像试验。体外构建LPADM+ADSCs,在体移植鼠背部,左侧为实验组:LPADM+ADSCs,右侧为对照组:LPADM。术后第7、10、14d采用小动物活体成像技术观察外源性ADSCs在体活动情况:增殖合迁移。结果:（1）LPADM皮下埋藏实验。组织学检查:LPADM移植于SD大鼠背部创面后24 h,组织学检查即可观察到材料周围胶原蛋白沉积,未见新生组织及新生血管;透射电镜下观察到新生的单一结构的类血管内皮细胞。术后3d，LPADM基质泛红明显,提拉时其与筋膜及周围组织黏附尚紧密;LPADM的HE染色可见激光打孔处新生组织生长,其中新生血管广泛存在于微孔周围和微孔内,常以含有多枚重叠红细胞征象,微孔内外炎性细胞少见。术后10 d,LPADM中血管化已呈网络状。透射电镜未见无孔ADM新生的类血管内皮细胞。术后无孔ADM组组织学观察创面中可见炎性细胞,但未见有血管形成。（2）LPADM联合刃厚皮片移植实验。1、移植术区局部观察两组动物均存活,但不同时间移植皮片的颜色外观有差别。24h的LPADM组和PADM组移植皮片均苍白,无血色明显差异,大体差异不明显;72h的LPADM组移植皮片呈现白粉基本色,其下LPADM材料明显泛红,与筋膜及周围组织黏附紧密,PADM组皮片苍白,其下PADM呈瓷白色,与筋膜及周围组织黏附一般,可轻拉下自然分离,渗出明显,多伴有异味;5天的LPADM组皮片呈现基本粉红色,PADM组皮片不同程度发黑,部分甚至出现干瘪或潮湿,异味加重,差别明显;10天LPADM组皮片呈现明显粉红色,术后14天,实验组创面移植复合皮片生长情况好,真皮基质和皮片融合,平整,缝合处未见疤痕形成。对照组皮片坏死干燥,显着差别。2、创面愈合率术后2周,复合皮片实验组完全存活,而对照组皮片大部分坏死脱落,两组创面愈合率相比,99.40%±0.24%:25.41%±1.32%。（p<0.05,差异具有显着性）。3、HE组织检查结果术后24h,LPADM孔内可见白细胞浸润和渗出的纤维素,未见新生血管;术后72h,微孔内可见到新生血管,内含多个红细胞,炎性细胞少见;术后5天,LPADM处表现良好炎症反应,大量幼稚毛细血管从创面基底面向上涌向微孔处;术后10d,LPADM周围血管呈网络状,炎症细胞轻度分散。14天,LPADM周围血管化丰富,炎症反应轻微。无孔PADM,术后HE观察可见创面中大量炎性细胞,未见血管形成。4、两组ADM胶原网架中所成纤维细胞迁入及比较术后1、3天实验组创面基底新生组织涌向微孔结构,并从微孔底部向微孔内生长,取材过程中发现LPADM与创基的联合紧密,对照组较为松散,轻拉易与基底分离。术后3天,实验组显示微孔结构中有自基底向孔内涌入生长的大量新生组织,孔周边的基质中有较多的成纤维细胞形成的大量新胶原迁入。对照组的未打孔的基质胶原网偶见成纤维细胞散在的迁入现象。5、电镜观察结果术后3天的扫描电镜显示,实验组基底的基质组织和新生肉芽组织通过孔径结构沿着孔径内部从基底垂直向上涌向LPADM胶原网架中形成新基质生长,新生组织内小血管的生长旺盛’,为基质胶原网架中迁入的成纤维细胞的生长、增殖、分裂及分泌活动提供了良好的基质新生微环境。术后14天的透射电镜显示,实验组虽然LPADM中有及少量的炎症细胞的迁入,迁入基质网架的成纤维细胞电镜下核大呈不规则形、分裂旺盛,粗面内质网布满细胞液中。对照组的PADM新生组织的难以长入,迁入的成纤维细胞极少,炎症细胞为主。（3）LPADM联合中厚皮片移植实验。1、大体观察移植后14 d自体中厚皮片成活。30 d即可提捏术区皮肤,皮肤愈合质量良好。经复合移植的大鼠均存活,未见明显局部和全身过敏反应,其日常行为无异常,体质量正常增加。2、移植术区局部观察两组动物均存活,但移植皮片的不同时间颜色外观有明显差别。24h的LPADM组和PADM组皮片均苍白,无血色,二组无大体明显差异;72h的LPADM组皮片呈现基本粉红色,其下LPADM材料明显泛红,与筋膜及周围组织黏附紧密,PADM组皮片苍白,其下PADM呈瓷白色,与筋膜及周围组织黏附一般,可轻拉下自然分离,渗出明显,多伴有异味;5天的LPADM组皮片呈现粉红色,PADM组皮片不同程度发黑,部分甚至出现干瘪或潮湿,异味加重,差别明显;10天、14天的LPADM组皮片呈现明显粉红色,PADM组皮片发黑完全,干瘪或潮湿,流脓,差别显着。3、HE组织检查结果术后24h,LPADM孔内可见白细胞浸润和渗出的纤维素,未见新生血管;术后72h,微孔内可见到新生血管,内含多个红细胞,炎性细胞少见;术后5天,LPADM处表现良好炎症反应,大量幼稚毛细血管从创面基底面向上涌向微孔处;术后10 d，LPADM周围血管呈网络状,炎症反应良好,激光微孔孔内壁处颜色和孔周围ADM相融,蓝色变性组织弱化。14天，LPADM周围血管化丰富,炎症反应良好,激光微孔孔内壁处颜色淡化和孔周围ADM更相融表现。无孔PADM,术后HE观察可见创面中大量炎性细胞,未见血管形成。（3）连续HE标本动态高光谱分析。1、激光微孔LPADM材料高光谱分析与没有参与动物在体实验的LPADM全波段光谱（即0天LPADM,黑色曲线）对照,在体动物实验的LPADM绿色曲线在横轴20波段,均呈现出相应深“V”形特征,但随着时间1-15天,LPADM孔壁内测局部结构的光谱,纵轴的亮度值逐渐变大,由LPADM的1500附近（0天）到3000附近（15天）,说明,随着组织相相容性、炎症性、孔内壁坏死组织吸收后改善,透光度也相应提升;2、LPADM移植后,微孔内红细胞高光谱分析与正常皮肤内的成熟红细胞全波段光谱（黑色曲线）对照,LPADM红色曲线在特征位于10、25、40附近波段,均呈现出相应“V”形特征,与成熟的红细胞光谱曲线差异较大,但随着时间增加,新生血管中的红细胞光谱曲线逐渐与正常成熟红细胞的光谱曲线相吻合,如,第3天,就10波段的亮度值已达到3600，接近正常的3800;第10天,就10波段的亮度值已达到正常的3800;说明第3天LPADM新生血管生理活力已接近正常成熟皮肤血管;3、LPADM移植后,微孔内和微孔周围炎症细胞高光谱分析相同时间段,微孔内炎症细胞（绿色曲线）和周围的炎症细胞（蓝色曲线）光谱相对比,两条曲线在横轴20波段,均呈现出相应深“V”形特征,两者差异不大,随着时间增加,炎症细胞光度值也未有过明显起伏表现,说明经过激光贯穿、化学脱细胞处理均未对大鼠免疫系统产生应激和影响大鼠创面正常的修复。（4）BMsc-LPADM在体移植试验。1、LPADM、无孔猪ADM呈瓷白色,柔软、有弹性,组织学观察显示真皮基质未见细胞成分;扫描电镜示孔径中胶原纤维排列有序;LPADM还有微孔结构。2、细胞传至第3代时,形态趋于一致,呈Fb样,生长较快。3、诱导分化实验表明,细胞可向成骨细胞、成脂肪细胞分化。4、移植术后5 d，A组无孔猪ADM局部干燥,D组皮片局部干燥坏死,A、D组均未见感染及炎症反应;B、C组移植皮片成活。移植术后7、14 d，A组表面的覆盖物局部色泽发黑,干燥发硬;D组皮片出现完全变黑下燥坏死,皮下可见淡黄色清亮渗液;A、D组均未见明显脓性分泌物。B、C组皮片外观与周围皮肤颜色接近;5、移植术后5、7 d，A、B、C组真皮基质的微孔结构中已见血管化,其内可见有形红细胞;D组移植皮片部分干燥坏死。移植术后14 d,A、B、c组真皮基质的微孔结构中己完全血管化,其内可见大量的红细胞,纵切片中,A组微孔真皮基质成活,但与其上所覆盖的无孔猪ADM未紧密结合;B、c组皮片与真皮基质问连接紧密,皮片中均未见皮肤附属器,c组创面皮片与真皮基质交接处可见特殊的单层细胞;6、D组移植皮片未能成活,故放弃电镜观察。移植术后7 d,A、B、c组透射电镜图片未见明显差别:移植术后14d，A、B组移植物中未见皮脂腺样及汗腺样细胞,也未见新生神经末梢,仅见Fb迁入,c组创面刃厚皮与真皮基质交接处可见大量新生毛细血管增生,Fb粗面内质网分裂增殖旺盛,可见新生的无髓神经末梢;在真皮基质浅层,出现单个游离的皮脂腺样及汗腺样细胞。（5）LPADM+脂肪源干细胞（ADSCs）小动物活体成像试验。在体移植鼠背部,左侧为实验组:PADM+ADSCs,右侧为对照组:LPADM+ADSCs。小鼠单笼饲养7、10、14d后,带至活体成像室。3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠,每只注射0.2mL。在小动物成像仪中成像（小动物活体成像仪为IVIS LuminaII）,并记录。观察到荧光显示,并向创伤区没有干细胞铺被区增殖和迁移。结论:LPADM是一种具有低免疫原性、早期稳定血管化能力的一种新型真皮替代物,高光谱分析提出其特征性指纹光谱可供血管化快速鉴定,指纹特征光谱可以作为识别标志物;LPADM有助于促进细胞修复,甚至修复皮肤附件器官新生。
渠开攀[9]（2017）在《重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶对深Ⅱ°烧伤创面愈合的影响及其机理分析》文中提出目的:观察和评估局部外用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF）凝胶治疗深Ⅱ°烧伤创面对创面修复进程的影响,并初步分析和探讨其可能的生物学作用机理,以期为深Ⅱ°烧伤创面治疗提供临床经验参考,并为临床外用rh GM-CSF凝胶治疗深Ⅱ°烧伤创面提供理论依据。方法:将2015年3月至2016年9月在烧伤整形科病房住院并符合试验纳入标准的深Ⅱ°烧伤患者按抽签法随机分为rh GM-CSF凝胶试验组（n=48）和凡士林油纱对照组（n=48）。试验组将rh GM-CSF凝胶（生产厂商:长春金赛药业有限责任公司,国药准字S20080003,规格:每支100μg:10 g）适量涂抹于深Ⅱ°烧伤创面,外面覆盖以凡士林油纱,再以医用纱布包扎固定。对照组则仅在创面上以凡士林纱布覆盖,外层同样采用医用纱布包扎固定。试验周期为28 d。观察并记录两组患者用药后第7天、第14天和第21天的创面愈合率和总有效率及创面完全再上皮化所需时间。并留取依从性较好的患者创面用药前及用药后第7天和第14天创面基底组织标本,采用免疫组织化学检测转化生长因子β1（TGF-β1）和转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）的表达情况。收集并整理所获得的试验数据进行统计学分析,P<0.05差异有统计学意义。结果:本次试验中最终有96例患者完全符合试验要求,被纳入统计学分析,其中rh GM-CSF凝胶试验组48例,对照组48例。rh GM-CSF凝胶试验组的创面愈合时间与对照组相比较要明显缩短,差异有统计学意义（log-rank法χ2=27.64,P<0.05）。试验组用药后第7天、第14天和第21天的创面愈合率分别为（30±15）%、（70±22）%、（91±8）%,均显着高于对照组[（19±11）%、（46±18）%、（76±18）%,P<0.05];试验组和对照组均进行疗效评价并进行比较,试验组的疗效要显着好于对照组（P<0.05）;将两组在用药后第7天（4.2%VS 0.0%）、第14天（60.5%VS18.8%）和第21天（98.0%VS81.2%）的总有效率分别进行对比,各时点差异均有统计学意义（P<0.05）;创面初次用药前两组创面基底组织中TGF-β1及其受体TβRⅡ的表达未见明显不同,差异无统计学意义（P>0.05）;而在用药后第7天、第14 d天试验组创面中TGF-β1及其受体TβRⅡ的表达较对照组均有显着增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:深Ⅱ°烧伤创面采用局部外用rhGM-CSF凝胶治疗方法能够显着加强促进创面愈合,这可能与rh GM-CSF能够提高深Ⅱ°烧伤创面基底组织中TGF-β1和TβRⅡ的表达密切相关。
吕庆兵[10]（2017）在《人工真皮在治疗特重度烧伤后期功能重建中的临床效果分析》文中研究指明目的:研究评价人工真皮（皮耐克）联合自体刃厚皮片治疗特重度烧伤后期功能重建中的临床效果。方法:2015年6月-2016年6月在昆山8.2事件中大批特重度烧伤后期康复患者中,选取40例烧伤面积均大于85%,III度烧伤面积均大于50%,瘢痕面积均大于50%,烧伤后功能部位瘢痕挛缩（40处）受限者。20例行功能部位瘢痕松解皮耐克移植后二期结合自体刃厚皮移植修复,设为人工真皮组;另20例行瘢痕切除松解后一期薄中厚皮移植修复设为常规手术组。对两组患者进行以下数据的比较:术后5天,观察并计算植皮区自体皮成活率及植皮区感染情况;评定植皮区创面愈合时间;术后3、6、10个月,分别评定植皮区瘢痕情况;随访10个月,对术后功能部位功能恢复情况进行评定;评定供皮区创面愈合时间及术后10月供皮区的瘢痕评分。所有数据采用SPSS23.0软件进行处理。结果:术后5d人工真皮组患者自体皮成活率为（94.65±3.01）%,与常规手术组的（93.45±3.00）%接近（t=1.532,P=0.142>0.05）;人工真皮组2例患者植皮部位发生感染,与常规手术组的1例接近,P=1.000>0.05。人工真皮组患者术后3个月植皮区瘢痕情况改善分值为（3.70±1.17）分,显着低于常规手术组的（5.15±0.88）分（t=5.445,P<0.0001）;术后6、10个月改善分值分别为（4.80±1.24）分、（5.30±1.42）分,与常规手术组的（7.05±1.28）、（8.50±1.54）分值比明显偏低。（t值分别为6.485、7.847,P值均小于0.0001）。术后10个月人工真皮组功能部位功能改善为“好”的4例,较好15例,差1例。常规手术组功能部位改善为“好”的5例,较好8例,差7例。统计学分析（χ2=6.742,P=0.034）,人工真皮治疗组功能改善情况优于常规手术对照组。植皮区愈合时间,人工真皮组为（12.30±2.54）天,与常规手术组（12.70±1.98天）比较无统计学差异（p=0.898>0.05）;供皮区愈合时间人工真皮组平均愈合时间为（11.2±0.89）天,常规手术组平均愈合时间为（16.1±1.52）天,P<0.0001。人工真皮组供皮区平均愈合时间明显小于常规手术组。人工真皮组供皮区术后10月瘢痕评分算术平均值为（7.70±1.26）,常规手术组供皮区术后10月瘢痕评分算术平均值为（13.55±0.89）分,P<0.0001。人工真皮组供皮区术后10月瘢痕评分明显低于常规手术组。结论:瘢痕松解后人工真皮（皮耐克）移植结合二期自体刃厚皮片移植不影响患者早期皮片存活且能有效改善功能部位功能情况,较自体薄中厚皮移植可明显改善功能部位活动、减少供皮区瘢痕及缩短供皮区愈合时间。
二、Effect of implantation of skin Cell group on healing and function recovery of wound surface after deep degree burn（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Effect of implantation of skin Cell group on healing and function recovery of wound surface after deep degree burn（论文提纲范文）
（1）胎儿真皮间充质干细胞外泌体促进皮肤创面愈合的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章. 引言 |
| 1. 干细胞 |
| 2. 间充质干细胞 |
| 3. MSCs的旁分泌作用 |
| 4. 皮肤损伤与修复 |
| 第2章. FDMSC-Ex促进创面愈合的实验研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 结论 |
| 5. 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| English Paper Ⅰ |
| English Paper Ⅱ |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）烧伤瘢痕表皮结合组织工程真皮治疗瘢痕的临床研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 纳入与排除标准 |
| 1.2 随机分组 |
| 1.3 临床资料 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 创面愈合时间 |
| 2.2 并发症 |
| 2.3 温哥华瘢痕量表(VSS)评分 |
| 2.4 ADL关节评定 |
| 2.5 组织形态学 |
| 3 讨论 |
| 3.1 瘢痕治疗现状 |
| 3.2 对创面愈合时间差异的分析 |
| 3.3 并发症发生的原因分析及应对 |
| 3.4 三种治疗方法机制分析与比较 |
| 3.5 组织形态学分析 |
| 4 课题研究结论 |
| 5 本课题研究不足 |
| 参考文献 |
| 附件 病例展示 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
（3）脱细胞猪小肠黏膜下层与脱细胞猪真皮基质作为真皮支架的对比研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 序言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论与分析 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 真皮替代物的制备方法、研究进展及临床应用 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 在校期间论文发表及获奖情况 |
| 致谢 |
（4）TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TNF-α对小鼠MSCs向汗腺特异分化的影响 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 实验试剂配制 |
| 1.1.5 小鼠骨髓MSCs分离培养 |
| 1.1.6 汗腺细胞分离培养 |
| 1.1.7 利用生物打印技术在体外构建汗腺细胞外基质诱导小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 1.1.8 TNF-α处理小鼠MSCs |
| 1.1.9 RT-qPCR方法检测不同条件下小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物基因的差异 |
| 1.1.10 免疫荧光方法检测不同条件下小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物蛋白的差异 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 不同诱导条件对小鼠MSCs向汗腺细胞分化的影响 |
| 1.2.2 TNF-α对小鼠MSCs向汗腺细胞分化的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 小鼠MSCs在体外类汗腺细胞外基质环境中可以向汗腺细胞分化 |
| 1.3.2 炎症介质TNF-α抑制小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 1.4 小结 |
| 二、TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验试剂配制 |
| 2.1.5 小鼠骨髓MSCs分离培养 |
| 2.1.6 利用生物3D打印技术在体外构建汗腺细胞外基质诱导小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 2.1.7 TNF-α/MA2处理小鼠MSCs |
| 2.1.8 RT-qPCR方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs多能性因子Nanog及m6A相关调节酶基因表达的影响 |
| 2.1.9 Western blot方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs多能性因子Nanog及m6A相关调节酶蛋白表达的影响 |
| 2.1.10 免疫荧光方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs总 RNA的 m6A水平的影响 |
| 2.1.11 RT-qPCR方法检测MA2对小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物基因的影响 |
| 2.1.12 免疫荧光方法检测MA2对小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物蛋白的影响 |
| 2.1.13 MeRIP-qPCR方法检测TNF-α对小鼠MSCs Nanog mRNA的 m6A水平的影响 |
| 2.1.14 放线菌素D抑制小鼠MSCs转录检测TNF-α对 Nanog mRNA稳定性的影响 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 TNF-α对小鼠MSCs多能性因子Nanog表达的影响 |
| 2.2.2 TNF-α对小鼠MSCs总RNA的 m6A水平及相关调节酶表达的影响 |
| 2.2.3 抑制FTO去甲基化作用对小鼠MSCs的影响 |
| 2.2.4 FTO去甲基化作用调控小鼠MSCs Nanog表达的机制 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 炎症介质TNF-α抑制小鼠MSCs表达Nanog |
| 2.3.2 TNF-α抑制小鼠MSCs表达FTO提高总RNA的m6A修饰水平 |
| 2.3.3 MA2抑制FTO的去甲基化作用阻碍小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 2.3.4 FTO催化m6A去甲基化维持Nanog mRNA的稳定性 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 烧伤皮肤再生的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）UC MSCs移植微环境的改变对烧伤创面愈合的影响及机制（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 烧伤局部微环境的改变对UC MSCs增殖影响的体外研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 改善UC MSCs移植微环境对大鼠创面愈合的影响及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）人工真皮皮耐克（Pelnac）在治疗创伤骨科复杂创面的临床与基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 人工真皮皮耐克(Pelnac)在治疗创伤骨科复杂创面的临床应用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 无末端胶原促进体外培养的胸主动脉内皮细胞增殖、迁移及官腔形成的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 人工真皮在组织工程学和临床医学中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）Meek微型皮片植皮技术在成批烧伤救治中的临床应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1. 对象与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
（8）激光微孔猪脱细胞真皮基质构建及移植实验（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 参考文献 |
| 第2章 激光微孔猪脱细胞真皮基质( LPADM)构建 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 主要试剂、主要仪器及实验动物来源 |
| 2.1.2 激光微孔猪脱细胞真皮基质制备 |
| 2.1.3 激光微孔猪脱细胞真皮基质病原学检测 |
| 2.1.4 LPADM切片制作 |
| 2.1.5 LPADM扫描电镜制作 |
| 2.1.6 LPADM高光谱分析检测 |
| 2.1.7 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 激光微孔猪脱细胞真皮基质观察 |
| 2.2.2 激光微孔猪脱细胞真皮基质病原学检测 |
| 2.2.3 LPADM高光谱分析检测 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 实验照片 |
| 参考文献 |
| 第3章 LPADM的体外实验 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 主要试剂、主要仪器及实验动物来源 |
| 3.1.2 鼠成纤维细胞种植LPADM的体外实验 |
| 3.1.3 间充质干细胞-LPADM的体外实验 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 FB-LPADM共培养细胞生长情况 |
| 3.2.2 IL-10、IL-6、TGF-β1、LN、VEGF表达水平 |
| 3.2.3 复合皮观察 |
| 3.2.4 BMSCs形态,成脂、成骨分化鉴定;BMSCs-LPADM、BMSCs-无孔PADM共生长特点 |
| 3.2.5 ADSCs-LPADM、ADSCs-无孔PADM共生长特点 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 实验照片 |
| 参考文献 |
| 第4章 在体LPADM移植实验 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要试剂、主要仪器及实验动物来源 |
| 4.1.2 LPADM皮下埋藏试验 |
| 4.1.3 LPADM联合自体刃厚皮片Ⅰ期移植试验 |
| 4.1.4 LPADM联合自体中厚皮片Ⅰ期移植试验 |
| 4.1.5 在体HE组织切片高光谱分析 |
| 4.1.6 BMSCs-LPADM在体移植刃厚皮片移植修复裸鼠皮肤缺损和皮肤附件细胞再生实验 |
| 4.1.7 LPADM+脂肪源干细胞(ADSCs)小动物活体成像试验 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 LPADM皮下埋藏实验结果 |
| 4.2.2 LPADM联合自体刃厚皮片Ⅰ期移植试验 |
| 4.2.3 LPADM联合中厚皮片移植实验 |
| 4.2.4 LPADM在体材料高光谱分析 |
| 4.2.5 BMSCs-LPADM在体Ⅰ期移植刃厚皮片修复裸鼠皮肤缺损和附件细胞再生的实验研究 |
| 4.2.6 LPADM+脂肪源干细胞(ADSCs)小动物活体成像试验 |
| 4.3 讨论 |
| 实验照片 |
| 参考文献 |
| 综述组织工程皮肤支架应用现状研究和思考 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶对深Ⅱ°烧伤创面愈合的影响及其机理分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 仪器、试剂和耗材 |
| 3 标本采集及制备 |
| 4 观察指标 |
| 5 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 一般资料 |
| 2 创面愈合时间 |
| 3 创面愈合率 |
| 4 疗效评价 |
| 5 总有效率 |
| 6 免疫组化染色结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）人工真皮在治疗特重度烧伤后期功能重建中的临床效果分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 纳入标准和排除标准 |
| 1.2 主要材料 |
| 1.3 主要手术仪器、器材 |
| 2.方法 |
| 2.1 临床资料和分组 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 人工真皮植皮手术流程 |
| 2.4 评价指标 |
| 结果 |
| 1 自体皮成活率及感染情况 |
| 2 植皮区瘢痕情况 |
| 3 功能部位功能改善情况 |
| 4 植皮区植皮术后创面愈合时间 |
| 5 供皮区愈合时间及供皮区瘢痕情况 |
| 6 人工真皮组病理学改变 |
| 7 典型病例 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 致谢 |
四、Effect of implantation of skin Cell group on healing and function recovery of wound surface after deep degree burn（论文参考文献）
- [1]胎儿真皮间充质干细胞外泌体促进皮肤创面愈合的机制研究[D]. 王晓. 山东大学, 2019(02)
- [2]烧伤瘢痕表皮结合组织工程真皮治疗瘢痕的临床研究[D]. 崔泽龙. 广西医科大学, 2019(07)
- [3]脱细胞猪小肠黏膜下层与脱细胞猪真皮基质作为真皮支架的对比研究[D]. 吴晴晴. 苏州大学, 2019(04)
- [4]TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究[D]. 王一惠. 天津医科大学, 2019(02)
- [5]UC MSCs移植微环境的改变对烧伤创面愈合的影响及机制[D]. 李晓庆. 昆明医科大学, 2019(06)
- [6]人工真皮皮耐克（Pelnac）在治疗创伤骨科复杂创面的临床与基础研究[D]. 吕振木. 河北医科大学, 2019(01)
- [7]Meek微型皮片植皮技术在成批烧伤救治中的临床应用[D]. 郝晨晟. 苏州大学, 2018(04)
- [8]激光微孔猪脱细胞真皮基质构建及移植实验[D]. 罗旭. 苏州大学, 2018(01)
- [9]重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶对深Ⅱ°烧伤创面愈合的影响及其机理分析[D]. 渠开攀. 青岛大学, 2017(02)
- [10]人工真皮在治疗特重度烧伤后期功能重建中的临床效果分析[D]. 吕庆兵. 苏州大学, 2017(04)