论文题目: 14-3-3 ζ与肺癌转移关系的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理学与病理生理学
作者: 陈惠华
导师: 陆应麟
关键词: 肺癌,肿瘤转移,干扰
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 抑制消减杂交和基因芯片技术的联合应用是克隆差异表型相关基因的有效途径。我们利用该技术从人肺巨细胞癌高低转移株中筛选出41条与低转移细胞株表型相关的序列。在本研究中我们对其中的64号序列进行生物信息学分析,发现其与14-3-3ζ高度同源。目前有关14-3-3ζ与肺癌转移关系的研究尚未见报道,本研究将对14-3-3ζ在肺癌转移中的作用进行探讨。 我们利用RT-PCR、Western blot以及免疫细胞化学染色对14-3-3ζ在人肺巨细胞癌高低转移株中的表达水平进行了检测,结果发现在低转移株(PLA801C)的表达水平明显高于高转移株(PLA801D)。在此基础上,我们成功构建了正反义真核表达载体,并转染到PLA801C和PLA801D中。对稳定转染细胞株中14-3-3ζ表达水平的检测表明正反义载体分别促进或抑制了14-3-3ζ的表达。 通过对稳定转染株进行的细胞生物学功能实验,如细胞生长曲线、细胞周期、细胞集落形成、细胞黏附与迁移的研究,我们发现14-3-3ζ的过表达可以抑制肿瘤细胞的增殖,抑制其集落形成,促进细胞的黏附,抑制其迁移能力,14-3-3ζ的失活则导致细胞增殖加快,促进集落形成,抑制细胞的黏附,促进其迁移能力。由此推断14-3-3乙与肺癌细胞的转移有一定的相关性,14-3-3ζ的过表达可能抑制肺癌细胞的转移。 我们利用RNA干扰技术进一步研究14-3-3ζ与肺癌细胞转移的关系,被干涉的细胞中14-3-3ζ的表达水平明显降低,其黏附能力明显下降,而集落形成、迁移和侵袭能力则明显提高。 对20例肺癌患者原发灶与转移灶肿瘤标本的免疫组化分析,结果表明,20例患者标本中肿瘤组织皆为阳性。15例患者的原发灶比转移灶表达水平高,4例差异不显著,1例在转移灶有更高的表达。 结论:14-3-3ζ可能与肿瘤的转移表型密切相关,14-3-3ζ的过表达可能抑制肺癌的转移,而14-3-3ζ的失活可能促进肺癌的转移。其作用机理有待进一步阐明。14-3-3ζ可以作为临床肺癌诊断的辅助指标。
论文目录:
英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 64号序列的生物信息学分析
一、同源性分析
二、14-3-3ζ基因及其相应蛋白质的基本特征
讨论
第二部分 14-3-3ζ在人肺巨细胞癌高低转移细胞株中表达水平的检测以及稳定转染细胞株的建立
一、14-3-3ζ在人肺巨细胞癌高低转移株中表达水平的检测
二、14-3-3ζ正反义真核表达载体的构建
三、稳定转染细胞株的获取
四、稳定转染细胞株14-3-3ζ表达水平的变化
讨论
第三部分 14-3-3ζ在肺癌细胞转移中的功能研究
一、HE染色观察转染后细胞形态的变化
二、细胞计数
三、细胞周期检测
四、集落形成实验
五、细胞黏附实验(FN)
六、细胞黏附实验(Matrigel)
七、细胞迁移实验
讨论
第四部分 利用RNAi研究14-3-3ζ在肺癌转移中的作用
一、稳定表达载体的构建
二、稳定转染细胞株的获取
三、转染后14-3-3ζ表达水平的变化
四、细胞生物学实验
讨论
第五部分 免疫组化检测14-3-3ζ在临床肺癌中的表达
讨论
总结
参考文献
综述
研究论文
在读期间发表文章
个人简历
致谢
发布时间: 2005-09-05
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