本文主要研究内容
作者陈阳（2019）在《基于微流控芯片技术的抗白念珠菌药物筛选和细胞代谢产物研究》一文中研究指出：微流控芯片（microfluidic chip）又称芯片实验室,是一种在微小空间中操控微流体运动的技术,将化学、生物等领域涉及的样品制备、反应、分离、检测等功能单元集成到一块微小的芯片上,将传统实验室缩小成一块微流控芯片。该技术以纳米至微米尺度的流体为研究对象,具有高通量、高灵敏、微型化、功能集成化程度高、节约时间和试剂等独特优势。液滴微流控芯片作为微流控芯片的一个重要分支,以液滴作为微反应器,单次实验可以包裹生成多至千万个液滴,易于实现高通量筛选。由于液滴的尺寸与细胞大小近似,近年来该技术被广泛应用于微生物的研究包括,细菌,酵母和蓝藻等,该技术可以用来进行病原体的识别和检测等。目前,聚二甲基硅氧烷是实验室内微流控芯片研究最常用的芯片材料,由于其良好的生物相容性,适用于培养细胞,之后将细胞代谢物进行固相萃取前处理并进行质谱分析,在药物研发及疾病机制探究方面已取得一些进展。本研究采用微流控芯片技术在药物筛选和质谱联用分析研究细胞代谢物变化两方面进行了以下研究。1、本研究建立了用于抗白念珠菌药物筛选的浓度梯度生成液滴微流控芯片平台,通过染料苋菜红和荧光素钠在芯片上的分布考察浓度梯度生成情况。并通过液相色谱法对芯片内待测药物氟康唑的浓度梯度形成进行定量分析,进一步比较不同流速条件对浓度梯度形成的影响,最终确定两水相流速1:1的比例用于后续药物筛选研究。以阿尔玛蓝为细胞活力指示剂,通过该平台进行两性霉素B的药敏实验,一次实验可以获得两性霉素B的MIC范围是0.5-1.8μg/ml,与CLSI建议的白念珠菌敏感株对两性霉素B的MIC≤1μg/ml相一致,表明该平台可以通过一次实验可以快速筛选得到抗菌药物的MIC值范围。此外,又分别测试了氟康唑和特比萘芬等药物,其中,氟康唑等药物的MIC值范围与标准一致,而该批次白念珠菌对特比萘芬呈现耐药,与96孔板法对照验证结果一致。表明该方法还可以用于耐药菌株的快速筛选。2、基于微流控芯片质谱联用平台开展了细胞代谢产物变化的研究,以hBMEC作为研究对象,采用Aβ1-42刺激该细胞制备AD模型,分别将正常组、AD模型组、给药丹参总提物预保护组和给药石杉碱甲预保护组细胞培养于芯片通道内,通过液质联用分析监测各组间代谢产物变化情况。结果发现在96种监测的代谢产物中,正常组与模型组存在显著性差异的有12种,以氨基酸为主,经过通路分析发现分别涉及氨基酸代谢及生物合成的通路,其中相关程度最高的是与转运RNA生物合成相关的通路,与文献报道一致。同时经过对比发现给药丹参总提物组细胞在以上12种变化的化合物中有6种呈现回调趋势,部分体现出药物对细胞的保护作用及对细胞代谢行为产生的影响。由于微流控芯片内血管细胞的生存环境更接近于体内的血液流动状态,因此该芯片质谱联用的在线检测分析方法可以更好的模拟细胞于机体内的生存状态,从而在AD的发病机制及中药保护作用机制方面的研究中将发挥重要作用。
Abstract
wei liu kong xin pian （microfluidic chip）you chen xin pian shi yan shi ,shi yi chong zai wei xiao kong jian zhong cao kong wei liu ti yun dong de ji shu ,jiang hua xue 、sheng wu deng ling yu she ji de yang pin zhi bei 、fan ying 、fen li 、jian ce deng gong neng chan yuan ji cheng dao yi kuai wei xiao de xin pian shang ,jiang chuan tong shi yan shi su xiao cheng yi kuai wei liu kong xin pian 。gai ji shu yi na mi zhi wei mi che du de liu ti wei yan jiu dui xiang ,ju you gao tong liang 、gao ling min 、wei xing hua 、gong neng ji cheng hua cheng du gao 、jie yao shi jian he shi ji deng du te you shi 。ye di wei liu kong xin pian zuo wei wei liu kong xin pian de yi ge chong yao fen zhi ,yi ye di zuo wei wei fan ying qi ,chan ci shi yan ke yi bao guo sheng cheng duo zhi qian mo ge ye di ,yi yu shi xian gao tong liang shai shua 。you yu ye di de che cun yu xi bao da xiao jin shi ,jin nian lai gai ji shu bei an fan ying yong yu wei sheng wu de yan jiu bao gua ,xi jun ,jiao mu he lan zao deng ,gai ji shu ke yi yong lai jin hang bing yuan ti de shi bie he jian ce deng 。mu qian ,ju er jia ji gui yang wan shi shi yan shi nei wei liu kong xin pian yan jiu zui chang yong de xin pian cai liao ,you yu ji liang hao de sheng wu xiang rong xing ,kuo yong yu pei yang xi bao ,zhi hou jiang xi bao dai xie wu jin hang gu xiang cui qu qian chu li bing jin hang zhi pu fen xi ,zai yao wu yan fa ji ji bing ji zhi tan jiu fang mian yi qu de yi xie jin zhan 。ben yan jiu cai yong wei liu kong xin pian ji shu zai yao wu shai shua he zhi pu lian yong fen xi yan jiu xi bao dai xie wu bian hua liang fang mian jin hang le yi xia yan jiu 。1、ben yan jiu jian li le yong yu kang bai nian zhu jun yao wu shai shua de nong du ti du sheng cheng ye di wei liu kong xin pian ping tai ,tong guo ran liao xian cai gong he ying guang su na zai xin pian shang de fen bu kao cha nong du ti du sheng cheng qing kuang 。bing tong guo ye xiang se pu fa dui xin pian nei dai ce yao wu fu kang zuo de nong du ti du xing cheng jin hang ding liang fen xi ,jin yi bu bi jiao bu tong liu su tiao jian dui nong du ti du xing cheng de ying xiang ,zui zhong que ding liang shui xiang liu su 1:1de bi li yong yu hou xu yao wu shai shua yan jiu 。yi a er ma lan wei xi bao huo li zhi shi ji ,tong guo gai ping tai jin hang liang xing mei su Bde yao min shi yan ,yi ci shi yan ke yi huo de liang xing mei su Bde MICfan wei shi 0.5-1.8μg/ml,yu CLSIjian yi de bai nian zhu jun min gan zhu dui liang xing mei su Bde MIC≤1μg/mlxiang yi zhi ,biao ming gai ping tai ke yi tong guo yi ci shi yan ke yi kuai su shai shua de dao kang jun yao wu de MICzhi fan wei 。ci wai ,you fen bie ce shi le fu kang zuo he te bi nai fen deng yao wu ,ji zhong ,fu kang zuo deng yao wu de MICzhi fan wei yu biao zhun yi zhi ,er gai pi ci bai nian zhu jun dui te bi nai fen cheng xian nai yao ,yu 96kong ban fa dui zhao yan zheng jie guo yi zhi 。biao ming gai fang fa hai ke yi yong yu nai yao jun zhu de kuai su shai shua 。2、ji yu wei liu kong xin pian zhi pu lian yong ping tai kai zhan le xi bao dai xie chan wu bian hua de yan jiu ,yi hBMECzuo wei yan jiu dui xiang ,cai yong Aβ1-42ci ji gai xi bao zhi bei ADmo xing ,fen bie jiang zheng chang zu 、ADmo xing zu 、gei yao dan can zong di wu yu bao hu zu he gei yao dan sha jian jia yu bao hu zu xi bao pei yang yu xin pian tong dao nei ,tong guo ye zhi lian yong fen xi jian ce ge zu jian dai xie chan wu bian hua qing kuang 。jie guo fa xian zai 96chong jian ce de dai xie chan wu zhong ,zheng chang zu yu mo xing zu cun zai xian zhe xing cha yi de you 12chong ,yi an ji suan wei zhu ,jing guo tong lu fen xi fa xian fen bie she ji an ji suan dai xie ji sheng wu ge cheng de tong lu ,ji zhong xiang guan cheng du zui gao de shi yu zhuai yun RNAsheng wu ge cheng xiang guan de tong lu ,yu wen suo bao dao yi zhi 。tong shi jing guo dui bi fa xian gei yao dan can zong di wu zu xi bao zai yi shang 12chong bian hua de hua ge wu zhong you 6chong cheng xian hui diao qu shi ,bu fen ti xian chu yao wu dui xi bao de bao hu zuo yong ji dui xi bao dai xie hang wei chan sheng de ying xiang 。you yu wei liu kong xin pian nei xie guan xi bao de sheng cun huan jing geng jie jin yu ti nei de xie ye liu dong zhuang tai ,yin ci gai xin pian zhi pu lian yong de zai xian jian ce fen xi fang fa ke yi geng hao de mo ni xi bao yu ji ti nei de sheng cun zhuang tai ,cong er zai ADde fa bing ji zhi ji zhong yao bao hu zuo yong ji zhi fang mian de yan jiu zhong jiang fa hui chong yao zuo yong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国人民解放军海军军医大学的陈阳，发表于刊物中国人民解放军海军军医大学2019-07-01论文，是一篇关于微流控芯片论文,浓度梯度生成论文,药物筛选论文,液质联用论文,代谢物论文,人脑微血管内皮细胞论文,中国人民解放军海军军医大学2019-07-01论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国人民解放军海军军医大学2019-07-01论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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