去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的研究

去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的研究

论文摘要

本研究以去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞为研究对象,比较了不同成熟培养液对其成熟率、受精率、胚胎发育率的影响;利用透明带下的精子注射探讨了透明带对去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞受精的影响;利用透射电子显微镜技术在亚细胞结构上研究了去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中超微结构的变化。一、去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外成熟、体外受精初步研究本实验探讨了不同成分明确的成熟培养液对去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外成熟、体外受精和胚胎的体外发育的影响。结果表明:(1)对于常规的成熟培养液M199、α-MEM而言,去除卵丘细胞的卵母细胞成熟率要极显著低于卵丘卵母细胞复合体。(2)选用不同的成熟培养液,可以显著提高去除卵丘细胞的卵母细胞的成熟率。(3)去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在受精时存在着明显的障碍。(4)在成熟培养前去除卵丘细胞对植入前胚胎发育没有影响。二、精子注入去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外受精利用透明带下精子注射技术,研究透明带对受精的影响。结果表明:(1)利用精子带下注射技术可以极显著的提高去除卵丘细胞的卵母细胞的受精率,表明透明带结构的改变是去除卵丘细胞的卵母细胞存在受精障碍的重要原因之一。(2)对于常规的成熟培养液M199和α-MEM而言,去除卵丘细胞的卵母细胞的带下受精率仍然低于卵丘卵母细胞复合体,表明尚有其他不明因素影响去除卵丘细胞的卵母细胞的受精过程。(3)在成熟培养前,卵丘细胞的去除对带下受精胚胎的发育没有影响。三、去除卵丘细胞的卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构变化去除卵丘细胞会降低小鼠卵母细胞的成熟质量。本章利用透射电子显微镜技术观察去卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟过程中的超微结构变化,目的是在亚细胞水平上寻找由于卵丘细胞的去除而导致卵母细胞质量降低的原因。(1)去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中微绒毛由细长到短粗,由倒伏到直立均与卵丘卵母细胞复合体成熟过程中微绒毛变化规律相符。(2)去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中线粒体由簇状分布逐渐变为散布于卵质内,该过程与卵丘卵母细胞复合体成熟过程中线粒体变化规律相符。(3)去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中,皮质颗粒可能存在继发性生成障碍或者数量异常,该结果可能是去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞存在体外受精障碍的原因之一。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 目录
  • 缩略词表
  • 引言
  • 第一部分 实验研究
  • 第一章 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的初步研究
  • 1 材料和方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 1.3 数据统计
  • 2 结果与分析
  • 2.1 成熟培养液为M199时,卵丘细胞的去除与否对卵母细胞成熟率的影响
  • 2.2 不同成熟培养液中,卵丘细胞的去除与否对卵母细胞成熟率的影响
  • 2.3 成熟培养液为M199时,卵丘细胞的去除与否对卵母细胞受精率的影响
  • 2.4 不同成熟培养液中,卵丘细胞的去除与否对卵母细胞受精率的影响
  • 2.5 体外受精后受精卵的体外培养
  • 3 讨论
  • 3.1 去除卵丘的卵母细胞的体外成熟
  • 3.2 去除卵丘的卵母细胞的体外受精
  • 3.3 去除卵丘的卵母细胞的受精后发育培养
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 第二章 精子注入去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外受精
  • 1 实验材料和方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 2 结果
  • 2.1 体外成熟过程中,卵丘细胞的去除与否对透明带硬度的影响
  • 2.2 成熟培养液为TYH时,卵丘细胞的去除与否对带下注入精子后受精率的影响
  • 2.3 成熟培养液为HTF时,卵丘细胞的去除与否对带下注入精子后受精率的影响
  • 2.4 成熟培养液为M199时,卵丘细胞的去除与否对带下注入精子后受精率的影响
  • 2.5 成熟培养液为α-MEM时,卵丘细胞的去除与否对带下注入精子后受精率的影响
  • 3 讨论
  • 3.1 透明带对去除卵丘细胞的卵母细胞体外受精的影响
  • 3.2 去除卵丘对带下受精胚胎发育率的影响
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 第三章 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构变化
  • 1 材料与方法
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 1.3 透射电镜样品的制作
  • 2 结果
  • 2.1 成熟培养前期
  • 2.2 生发泡破裂期
  • 2.3 成熟培养中期
  • 2.4 MII期
  • 3 讨论
  • 3.1 微绒毛的变化
  • 3.2 线粒体的变化
  • 3.3 皮质颗粒的变化
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 结论
  • 图版
  • 第二部分 文献综述
  • 第一章 哺乳动物卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展
  • 1. 卵母细胞体外培养成熟研究概况
  • 2. 卵母细胞成熟的机理及判断
  • 3. 卵丘颗粒细胞对卵母细胞发育及成熟的影响
  • 4. 卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响
  • 5. 影响卵母细胞体外成熟的因素
  • 第二章 哺乳动物体外受精及胚胎发育的研究进展
  • 1. 精子获能
  • 2. 体外受精
  • 3. 受精卵的培养
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表的学术论文目录
  • 相关论文文献

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