人乳腺癌中珠蛋白hMAM mRNA、血管内皮生长因子VEGF的表达及临床意义的研究

论文摘要

目的:乳腺癌是危害妇女健康的恶性肿瘤,其远处转移是影响乳腺癌预后的主要因素。目前认为乳腺癌是一种全身性疾病,术后发生转移的主要原因之一是术前未检出的微小转移灶或术中肿瘤细胞进入血液。常规影像学方法只能发现直径≥1 cm的结节（约1 g） ,相当于109个肿瘤细胞,这时常常已出现其它系统或器官的转移;血浆中大分子肿瘤标志物浓度的改变常发生在疾病进展的晚期,因此寻找一种标志肿瘤早期转移的特异性指标,对早期发现处于亚临床阶段的微转移癌具有非常重要的临床价值。人乳腺珠蛋白基因（human mammaglobin,hMAM）是1996年美国学者Fleming及Watson利用差式筛选和cDNA末端扩增技术分离到的新的乳腺组织特异性基因,位于染色体11q13,编码一个分子量为10KD的分泌性差异表达蛋白,hMAMmRNA在正常乳腺上皮细胞中表达水平较低,在乳腺癌组织中表达上调,在正常血液和骨髓中没有表达。近年来有很多研究应用巢式RT-PCR技术检测乳腺癌患者外周血中hMAMmRNA的表达,证明hMAMmRNA是判断和监测乳腺癌血液微转移最重要的标志物之一。近年血管内皮生长因子家族在大多数肿瘤新生脉管形成中的作用逐渐受到重视,血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）是目前已知的对血管生成起直接作用的最重要因子,主要受缺氧的刺激产生,是具有扩散能力的内皮细胞的特异性有丝分裂原,它能刺激内皮细胞增生和迁移、形成新血管,同时能够提高血管渗透性,加强血管外基质中内皮细胞的迁移,能促进肿瘤转移的发生。乳腺癌组织中VEGF阳性表达的患者是否更容易发生血道的微转移呢?目前对这方面的研究却罕见报道。本研究应用巢式RT-PCR方法检测乳腺癌患者在辅助化疗前后外周血中hMAMmRNA的表达,应用单标免疫组化S-P法检测乳腺癌组织中VEGF蛋白的表达,分析hMAMmRNA、VEGF的表达与淋巴结转移、肿瘤TNM分期、C-erbB-2等乳腺癌相关因素之间的关系及两者之间的相关性,同时研究和分析hMAMmRNA在乳腺癌血液微转移中所起的作用,并探讨术后辅助化疗对控制乳腺癌血液微转移的影响。方法:收集沈阳军区总医院普外科2006年7月～2007年9月手术经病理证实的乳腺癌患者50例作为实验组,胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌患者各5例及20例乳腺纤维腺瘤、10例健康志愿者作为对照组。乳腺癌细胞系MCF-7作为阳性对照及进行敏感性检测。应用巢式RT-PCR技术检测实验组、对照组外周血中hMAMmRNA的表达;实验组50例乳腺癌患者在接受2～3周期术后辅助化疗（根据NCCN临床指南分别给予紫杉类、蒽环类及两者联合的化疗方案）后,应用巢式RT-PCR技术检测这些乳腺癌患者外周血中hMAMmRNA的表达;应用单标免疫组化S-P法检测乳腺癌及乳腺纤维腺瘤组织中VEGF蛋白的表达水平。采用SPSS14.0统计分析软件进行χ2检验分析。结果:50例乳腺癌患者外周血标本中,有17例出现201bp特异性扩增条带,阳性表达率为34.0%;而对照组外周血中均未检出hMAM mRNA的表达。在5个细胞浓度中,hMAM mRNA RT-PCR分析阳性的最低浓度为5细胞/ml,而1细胞/ml的MCF-7细胞悬液未检出hMAM mRNA的阳性表达,表明其敏感性较高。50例浸润性乳腺癌组织中,32例VEGF染色阳性,阳性率为64.0%（32/50）。20例乳腺纤维腺瘤标本中VEGF阳性率为25.0%（5/20）,显著低于乳腺癌组织中VEGF的表达强度,经χ2检验证实有统计学意义（χ2=10.735,P=0.005）。乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达与淋巴结转移状况、TNM分期有关,即随无淋巴结转移、1-3枚淋巴结转移、>3枚淋巴结转移,hMAM mRNA的阳性表达率增高（χ2=7.363,P=0.025）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者外周血hMAM mRNA阳性表达率分别为20.0%、27.3%、55.6%及75.0%,Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ、Ⅱ期hMAM mRNA的阳性表达率高（χ2=5.937,P=0.015）,而与患者年龄、肿瘤大小（T≤2cm和T>2cm两组）、病理类型、绝经情况、激素受体、P53、PCNA及C-erbB-2表达无关（P>0.05）。50例乳腺癌组织中VEGF蛋白表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移状况和TNM分期有关（P<0.05）,即随着肿瘤体积的增大、腋窝淋巴结转移数目增多,乳腺癌细胞中VEGF蛋白的表达也相应增加。VEGF蛋白的表达与乳腺癌组织中C-erbB-2表达相关（P=0.036）,与患者年龄无明显相关（P>0.05）。50例乳腺癌患者中,17例外周血中hMAM mRNA阳性的乳腺癌患者组织中VEGF染色阳性的15例,33例hMAM mRNA阴性的乳腺癌患者组织中VEGF染色阳性的17例,外周血中hMAM mRNA的表达与乳腺癌组织中VEGF的表达具有相关性（χ2=6.566,P=0.010）。辅助化疗前检测17例hMAMmRNA阳性的患者,经化疗2～3周期后13例hMAMmRNA转为阴性,转阴率76.5%（13/17） ,化疗前hMAMmRNA表达阴性的患者化疗后无1例阳性,提示术后辅助化疗能够降低血液hMAMmRNA的阳性率,化疗前后差异有统计学意义（P=0.001）。结论:hMAMmRNA相对特异性地表达于乳腺癌组织中,在外周血中检测出hMAMmRNA时,提示已有癌细胞进入血液,表明血中可能存在微转移,因此hMAMmRNA有望成为判定乳腺癌血道微转移标志物。乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达与乳腺癌组织中VEGF的表达具有相关性,提示VEGF表达阳性的乳腺癌病人可能更易发生血道的微转移。检测乳腺癌外周血中hMAMmRNA表达的变化可以反应术后辅助化疗对乳腺癌血液微转移的影响,有望成为一个重要的独立预后指标。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料
• （五） 方法
• （六） 结果
• （七） 讨论
• （八） 结论
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、缩略语