卡维地洛对家兔动脉粥样硬化模型中热休克蛋白60及斑块稳定性影响的实验研究

论文摘要

目的:热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）是生物体对外界刺激发生反应而产生的应激蛋白,在应激情况下起到细胞保护作用,包括HSP60家族等。虽然HSP60与AS发病已有大量研究资料支持,但是多集中于AS早期发病和中期进展,与最终AS出现不稳定性斑块这方面的研究较少。而斑块的不稳定状态正是临床上有症状的心血管事件的病理基础。因此,HSP60在AS斑块不稳定发生中的作用值得深究。卡维地洛（carvedilol）是非选择性β受体阻滞剂,它的强大抗氧化作用在AS中的治疗潜力越来越受到重视。目前,国内外尚无卡维地洛对HSP60及斑块稳定性影响的相关研究。本实验研究目的是了解局部HSP60、血清可溶性HSP60是否与AS发展最终阶段出现不稳定斑块有关,HSP60与斑块稳定性有关的可能机制;卡维地洛能否通过其抗氧化应激作用影响HSP60在斑块处的表达,影响HSP60释放入血,从而影响下游炎症反应过程。方法:采用家兔喂与高脂饲料4周后造成高脂血症,在此基础上加以髂动脉球囊剥脱术,建立兔动脉粥样硬化狭窄模型。随机分为高脂对照组和卡维地洛给药组,再喂养6周,处死动物后获取动脉标本,观察血管局部AS斑块病变形成情况,行大体观察和病理切片镜下观察,分别测量其血管面积和斑块面积、脂质坏死核面积,并对斑块局部HSP60、基质金属蛋白酶-2（matrixmetalloprotease-2,MMP-2）表达分布情况行免疫组化染色观察。在应用卡维地洛药物前后,留取血清标本,采用酶联免疫吸附测定试验（enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA）测定血清可溶性HSP60（serum-soluble HSP60,sHSP60）、白介素-18（interleukin-18,IL-18）、白介素-6（IL-6）、ox-LDL,酶法测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）,血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）。观察脂质过氧化程度及机体抗氧化能力的改变,进行组内用药前后对比及组间对比分析,并计算各考察因素之间的相关关系。结果:1.高脂喂养和髂动脉球囊内膜损伤后,兔髂动脉处出现明显动脉粥样硬化,管腔呈偏心性狭窄,内膜下有大量泡沫细胞,内弹力膜拉伸,分离,断裂,坏死脂质核明显。卡维地洛用药后,血管病变较高脂组减轻,多数未见明显粥瘤及坏死物质沉积,卡维地洛高剂量组在血管面积和斑块面积上明显低于高脂对照组（76299.00±29053.36μm2 vs 181265.3±51605.97μm2,P=0.012;56277.9±31518.72μm2 vs 145364.1±44414.71μm2,P=0.013）,不稳定高危性斑块数目较高脂对照组有减少趋势。2.高脂对照组斑块中HSP60、MMP-2表达呈强阳性,分布于内膜、内膜下区域,纤维帽和脂核坏死核周围组织亦有分布,延伸如坏死核下的中膜层,及AS斑块的肩部。在卡维地洛用药组中,表达量较少,多分布于增厚的内膜中,内皮细胞和平滑肌细胞中较多,泡沫细胞中较少。卡维地洛用药组HSP60阳性表达面积的表达量明显低于高脂对照组（11493.67±2970.02μm2 vs 18530.23±2187.44μm2,P=0.005;13419.64±4700.10μm2 vs 18530.23±2187.44μm2,P=0.028）。MMP-2的表达量明显低于高脂对照组（6604.13±1887.48μm2vs8141.57±1770.57.44μm2,P=0.002;7401.00±1815.42μm2 vs 8141.57±1770.57μm2,P=0.007）。HSP60的表达量和MMP-2的表达量之间存在明显正相关关系（r=0.709,P=0.001）。3.高脂对照组比空白对照组之间血清sHSP60、ox-LDL、MDA、IL-6水平显著升高,卡维地洛用药后,高剂量组均有明显下降（106.30±28.45ng/ml vs140.58±25.56 ng/ml,P=0.045;111.23±25.18 pg/ml vs 132.73±29.11pg/ml,P=0.016;28.23±4.31nmol/ml vs 12.77±2.74nmol/ml,P=0.000;17.08±3.02μg/ml vs20.93±1.87μg/ml,P=0.024）,IL-18水平各组间及组内变化趋势不明显。sHSP60水平分别与ox-LDL、MDA、SOD、IL-6相关,其中与ox-LDL存在较强关系。结论:1.喂与高脂饮食,同时加用髂动脉球囊内膜剥脱术损伤后可以成功建立兔的AS斑块模型,在病理特点上与人类斑块有可比性。2.兔AS斑块处有HSP60与MMP-2的表达,HSP60表达量和MMP-2表达量之间存在的明显正相关关系说明HSP60对MMP-2的表达可能有上调作用,从而通过其影响斑块稳定性。3.在兔外周血中有sHSP60存在,加于高脂血症因素后有明显升高。在高脂喂养后IL-6表达增加,同时并存sHSP60的升高,从两者的相关关系可推测sHSP60与IL-6之间存在有相互影响,从而对AS的稳定性发展起作用。sHSP60的促炎症作用可能对IL-18无明显作用。4.卡维地洛可使AS斑块处MMP-2、HSP60的表达下调,推测卡维地洛可能通过其巨大抗氧化功能影响自由基代谢,通过脂质过氧化使sHSP60产生减少,下游的进一步炎症反应受到抑制,从而影响斑块的稳定性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 一、动物模型的建立
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、卡维地洛对AS斑块稳定性及对局部MMP-2、HSP60的作用
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、卡维地洛抗氧化功能对血清HSP60、炎症因子的作用及与斑块稳定性关系
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 局限性
• 结论
• 参考文献
• 综述 卡维地洛与动脉粥样硬化
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢