傣药榼藤子炮制前后质量分析及其毒理与药效研究

论文摘要

傣药榼藤子为豆科榼藤子属植物榼藤子Entada phaseoloides （Linn. ）Merr.的干燥种仁,该属植物广泛分布于美洲和非洲,全世界共约30种,我国产1种。榼藤子为我国傣族地区习用药材,主要应用于治疗胃痛、痔疮、水肿、便秘等病症。现代药理研究表明,榼藤子属植物具有抗菌、抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种生物活性。为了更好地开发利用榼藤子,本文对榼藤子炮制前后的化学成分变化、毒性及有效性进行了系统的研究。本研究采用HPLC-UV分别对榼藤子生品和炮制品的指纹图谱进行研究,用HPLC-ESI-MS对其生品共有峰进行鉴定。结果标示出生品16个共有峰,炮制品21个共有峰,应用HPLC-MS和对照品保留时间的对应初步鉴定了其中9个共有峰,主要为榼藤子三萜皂苷类和其他糖苷类成分的吸收峰。榼藤子生品炮制后,60%甲醇提取液中部分化学成分含量有不同程度的下降或上升,指纹图谱的主峰数目也有变化,说明该法可以较全面地反映榼藤子炮制前后化学成分的差异,用于控制生品和炮制品的内在质量。本研究采用HPLC法测定榼藤子生品与炮制品中Phaseoloideside D、Phaseoloideside E两种皂苷的含量,结果表明榼藤子生品经炮制后,Phaseoloideside D和Phaseoloideside E的含量略有下降,本法简便快捷,结果可靠,用于控制榼藤子生品和炮制品的质量。本研究利用HP-20大孔树脂对榼藤子总皂苷进行富集与纯化,以榼藤子皂苷Rheediinosede B作为含量测定的指标,采用酶标仪法建立了榼藤子总皂苷的含量测定方法。本法操作简单易行,结果稳定,为榼藤子总皂苷的质量控制提供参考。本研究采用灌胃给药的方式,观察榼藤子生品及不同炮制品对小鼠的急性毒性反应,并测定其LD50;采用小肠炭末推进法及甲基橙比色法,来考察榼藤子生品及炮制品对小鼠胃肠运动的影响;采用S180小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,榼藤子治疗10 d后,计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数和肝脏指数;测定荷瘤小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀炎症模型,以及测定角叉菜胶致炎小鼠血清SOD和MDA水平,研究榼藤子的抗炎作用。结果榼藤子生品及炮制品1号,2号对小鼠的LD50分别为27.17 g/kg,35.13 g/kg,42.18 g/kg,表明榼藤子经炮制后,毒性下降;榼藤子生品及炮制品能明显促进正常小鼠的肠蠕动,对阿托品所致小肠运动的抑制有明显的拮抗作用,但对新斯的明所致小肠运动的亢进无明显作用;榼藤子炮制前后高、中、低剂量组对正常小鼠胃排空均有明显抑制作用;榼藤子生品及炮制品总皂苷能显著抑制小鼠S180肉瘤的生长,提升荷瘤小鼠血清SOD的活力,降低MDA水平,表明榼藤子具有明显的抗肿瘤作用;榼藤子生品和炮制品总皂苷对二甲苯诱发小鼠耳肿胀及角叉菜胶致小鼠足跖肿胀均有显著的抑制作用,说明该药有良好的抗炎作用;榼藤子生品与炮制品总皂苷可明显增加角叉菜胶致炎小鼠血清中SOD的含量,减少角叉菜胶致炎小鼠血清中MDA的含量,提示其抗炎机制与提高体内抗氧化酶活性和自由基清除剂水平有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 榼藤子的本草考证
• 1.1.1 异名
• 1.1.2 炮制
• 1.1.3 附方
• 1.1.4 古籍文献收载
• 1.1.5 标准收载
• 1.2 不同种属的民俗用法
• 1.3 榼藤子属植物化学成分研究概况
• 1.3.1 榼藤子化学成分研究概况
• 1.3.2 榼藤酰胺类化学成分研究概况
• 1.3.3 酚及酚苷类化学成分研究概况
• 1.3.4 三萜皂苷类化学成分研究概况
• 1.4 榼藤子的药理研究现状
• 1.4.1 毒性作用
• 1.4.2 抗真菌作用
• 1.4.3 抗氧化活性
• 1.4.4 抗病毒活性
• 1.4.5 降血糖活性
• 1.4.6 抗肿瘤作用
• 1.4.7 抗炎镇痛作用
• 1.4.8 保肝作用
• 1.4.9 胰岛酶抑制剂
• 1.4.10 ACE 抑制剂
• 1.5 本研究的目的与意义
• 第2章 榼藤子HPLC 指纹图谱研究
• 2.1 概论
• 2.2 仪器、试剂与试药
• 2.3 药材提取条件的选择
• 2.3.1 单因素考察
• 2.3.2 正交试验的设计
• 2.4 HPLC 指纹图谱的方法与结果
• 2.4.1 实验条件
• 2.4.2 对照品溶液的配制
• 2.4.3 供试品溶液的制备
• 2.4.4 测定法
• 2.4.5 方法学考察
• 2.4.6 指纹图谱的分析与评价
• 2.5 讨论
• 第3章 榼藤子HPLC 含量测定方法研究
• 3.1 概述
• 3.2 仪器、试剂与试药
• 3.3 方法与结果
• 3.3.1 色谱条件
• 3.3.2 对照品溶液的配制
• 3.3.3 供试品溶液的制备
• 3.3.4 线性关系考察
• 3.3.5 精密度试验
• 3.3.6 稳定性试验
• 3.3.7 重复性试验
• 3.3.8 加样回收率试验
• 3.3.9 样品的含量测定
• 3.4 讨论
• 第4章 榼藤子总皂苷提取及其含量测定方法研究
• 4.1 概述
• 4.2 仪器、试剂与试药
• 4.3 榼藤子总皂苷含量测定方法的建立
• 4.3.1 对照品溶液的制备
• 4.3.2 供试品溶液的制备
• 4.3.3 测定波长的选择
• 4.3.4 线性关系的考察
• 4.3.5 精密度试验
• 4.3.6 重复性试验
• 4.3.7 稳定性试验
• 4.3.8 加样回收率试验
• 4.4 榼藤子总皂苷的制备
• 4.4.1 大孔树脂预处理
• 4.4.2 上样溶液的制备
• 4.4.3 榼藤子总皂苷的纯化
• 4.4.4 榼藤子总皂苷含量测定
• 4.5 讨论
• 第5章 榼藤子炮制前后急性毒性研究
• 5.1 概述
• 5.2 实验材料
• 5.2.1 实验动物与材料
• 5.2.2 药材
• 5.2.3 药材处理
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 榼藤子生品及其不同炮制品对小鼠的LD50 测定
• 5.3.2 榼藤子生品及其不同炮制品对小鼠急性毒性的对比试验
• 5.4 实验结果
• 5.4.1 榼藤子生品及其不同炮制品对小鼠的LD50 测定
• 5.4.2 榼藤子生品及其不同炮制品对小鼠急性毒性的对比试验
• 5.5 讨论
• 第6章 榼藤子炮制前后药效研究
• 6.1 概述
• 6.2 实验材料
• 6.2.1 实验动物、仪器及试剂
• 6.2.2 药材
• 6.2.3 药材处理
• 6.3 实验方法
• 6.3.1 榼藤子生品及炮制品对小鼠小肠推进的影响
• 6.3.2 榼藤子生品及炮制品总皂苷的体内抗肿瘤作用研究
• 6.3.3 榼藤子生品及炮制品总皂苷的抗炎作用研究
• 6.3.4 统计学处理
• 6.4 实验结果
• 6.4.1 榼藤子生品及炮制品对小鼠小肠推进的影响
• 6.4.2 榼藤子生品及炮制品对小鼠胃排空的影响
• 6.4.3 榼藤子生品及炮制品总皂苷的体内抗肿瘤作用研究
• 6.4.4 榼藤子生品及炮制品总皂苷的抗炎作用研究
• 6.5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录：攻读学位期间发表的学术论文