论文摘要
目的：研究自噬／溶酶体途径在脑外伤后激活情况，并对其在神经损伤修复中的作用进行探讨。方法：采用自由落体法建立大鼠脑外伤（traumatic brain injury,TBI）模型，透射电镜法观测损伤区及其周边区（皮层与海马）神经元中自噬体的形成情况，免疫组化及免疫印记法检测损伤区及其周边区（皮层与海马）自噬／溶酶体途径相关蛋白cathepsin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclin1的表达。免疫荧光双标及激光共聚焦法检测损伤区及其周边区（皮层与海马）cathepsin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclin1阳性细胞与caspase-3阳性细胞的共表达情况。结果：透射电镜显示大鼠脑外伤后1h即见到损伤及周边区神经元内自噬体形成，4d-8d出现最为明显，一直持续到32d。免疫印记及免疫组化结果显示，脑外伤后1h cathepsin-B表达增加（P＜0.05），8d达高峰，32d仍有较多表达（P＜0.05）；脑外伤后12h cathepsin-D表达增加（P＜0.05），8d达高峰，32d仍有较多表达（P＜0.05）；脑外伤后1h LC3、Beclin1表达增加（P＜0.05），均于8d达高峰，32d仍有较多表达（P＜0.05）。免疫荧光双标结果显示，脑外伤初期，cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少，脑外伤后6h开始增加，32d仍然有很多阳性细胞重叠；脑外伤初期，LC3和Beclin1阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少，脑外伤后24h开始增加，32d仍然有较多阳性细胞重叠。结论：1．大鼠脑外伤后自噬被激活。2．大鼠脑外伤后溶酶体酶激活。其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活，之后（6h后）则与caspase-3起协同作用，共同促进细胞死亡。3．在脑外伤后修复过程中，自噬对一些神经细胞起持续性保护作用，这种作用在脑外伤初期尤为明显；在脑外伤中晚期则可能参与促进神经细胞死亡过程。4．自噬和凋亡促进了溶酶体酶的活化及次级溶酶体形成。5．LC3、Beclin1、cathepsin-B和-D表达的时程变化对脑外伤的存在具有法医学诊断意义，同时有利于对中晚期脑外伤形成时间的推断。