CIAPIN1基因的表达与肺癌发生的关系及对肺癌细胞生长影响的研究

论文摘要

目的:探讨新基因CIAPIN1在人肺癌和癌旁正常组织中的表达差异情况及该基因导入对人肺癌细胞恶性生物学行为的影响,并初步探讨相应的调控机制。方法:（1）采用免疫组化方法检测51例石蜡包埋的肺癌及癌旁正常肺组织中CIAPIN1蛋白的表达;（2）Western blot方法检测肺癌细胞系和永生化人肺支气管上皮细胞系中CIAPIN1蛋白表达;（3）构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因（Ad-CIAPIN1）,转染到自身CIAPIN1低表达的人小细胞肺癌细胞系NCI-H446和人肺腺癌细胞系A549,Western blot检测目的蛋白的表达;MTT法绘制转染细胞的生长曲线;流式细胞术（FCM）分析细胞周期及细胞凋亡的变化;（4）建立NCI-H446/A549-裸鼠肿瘤模型,局部注射Ad-CIAPIN1后,观察其对肿瘤生长的抑制作用;（5）采用分子免疫印记技术,筛选CIAPIN1基因阻滞肺癌细胞周期的相关分子。结果: （1）癌旁正常肺组织中CIAPIN1基因蛋白阳性表达率为100 %明显高于肺癌组织中表达率39.2 % （P<0.05）;（2）CIAPIN1蛋白在所检测的4种肺癌细胞系和永生化人肺支气管上皮细胞系中均有不同程度的表达,其中人肺小细胞癌细胞系NCI-H446和人肺腺癌细胞系A549呈弱表达;（3）与对照组相比,腺病毒介导的CIAPIN1实验组能迅速抑制NCI-H446、A549细胞的生长（P<0.01）,诱导细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象;（4）荷瘤裸鼠于肿瘤局部注射Ad-CIAPIN1后,与2对照组相比,实验组肿瘤的生长速度和瘤体大小受到明显抑制（P<0.05）。结论:肺癌组织中CIAPIN1基因表达下调可能与肺癌发生密切相关,以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在肺癌细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用。初步揭示CIAPIN1基因可能通过下调CyclinD1、上调P27干预了细胞周期,从而抑制肿瘤的生长。提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 第一部分 CIAPIN1基因的结构和功能
• （一） CIAPIN1基因及蛋白结构
• （二） CIAPIN1基因功能研究
• （三） CIAPIN1基因与其他肿瘤的相关性
• 第二部分 肺癌基因治疗的现状
• （一） 基因治疗的途径
• （二） 转基因的方法及基因治疗的载体系统
• 第三部分 CyclinD1、p27在肿瘤中的研究
• （一） CyclinD1的结构和功能
• （二） CyclinD1基因结构、功能异常与肿瘤
• （三） CyclinD1过表达与肿瘤相关分子的相互作用
• （四） CyclinD1过表达与肿瘤转移及预后
• 正文
• 第一部分 CIAPIN1 基因在人肺癌细胞系和组织中的表达研究
• 前言
• 1 材料
• 1.1 细胞株和组织标本
• 1.2 主要仪器和试剂
• 1.3 主要溶液配制
• 2 方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 CIAPIN1 免疫组织化学染色（SABC法）
• 2.3 Western blot
• 3 结果
• 3.1 CIAPIN1 在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达
• 3.2 CIAPIN1 在肺癌细胞系和人正常气管上皮细胞系中的表达
• 4 讨论
• 第二部分 CIAPIN1 腺病毒载体构建和基因转染
• 前言
• 1 材料
• 1.1 细胞株
• 1.2 主要仪器和设备
• 2 方法
• 2.1 重组腺病毒的构建和鉴定
• 2.2 重组腺病毒滴度测定
• 2.3 重组腺病毒感染目的细胞
• 3 结果
• 3.1 重组腺病毒滴度测定
• 3.2 重组体腺病毒介导CIAPIN1 基因的表达
• 4 讨论
• 第三部分 腺病毒介导的CIAPIN1 基因对人肺癌细胞生长的影响
• 前言
• 1 材料
• 1.1 细胞株和实验动物
• 1.2 主要仪器和试剂
• 2 方法
• 2.1 Ad-CIAPIN1 对肺癌细胞体外增值的影响
• 2.2 Ad-CIAPIN1 对肺癌细胞裸鼠体内成瘤的影响
• 2.3 Western blot 检测CIAPIN1 与细胞周期相关分子的联系
• 3 结果
• 3.1 Ad-CIAPIN1 对肺肿瘤细胞的抑制作用
• 3.2 Ad-CIAPIN1 对肺癌细胞周期的阻滞作用
• 3.3 Ad-CIAPIN1 对肺癌细胞裸鼠体内成瘤的抑制作用
• 3.4 CIAPIN1 对细胞周期相关分子CyclinD1、P27 的影响
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢