论文摘要
目的:构建糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）特异的RNAi腺病毒表达载体,从转录后水平抑制GSK-3β基因表达,为研究Wnt/β-连环蛋白信号信号通路提供技术工具;初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响。方法:设计合成三对针对GSK-3β不同位点的shRNA编码序列,克隆到穿梭载体中,后通过体外同源重组将siRNA表达盒转移到腺病毒骨架质粒,构建GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体;在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度;腺病毒感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,Western Blot和免疫细胞化学法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应,并进一步检测其对细胞内β-catenin蛋白水平的影响;利用构建的RNAi腺病毒感染HUVEC,抑制GSK-3β表达,上调Wnt/信号通路,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对细胞增殖的影响。结果:成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液。构建的腺病毒感染人脐静脉内皮细胞可以显著抑制GSK-3β蛋白的表达,在腺病毒的影响下,β-catenin的蛋白水平亦有明显增加。腺病毒感染1天、3天、5天、7天后,腺病毒组与空病毒组相比,细胞增殖率明显增加（p<0.05、p<0.01）。结论:构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒能有效抑制GSK-3β基因的表达,明显影响β-catenin的蛋白水平,上调Wnt/β-catenin信号通路,对人脐静脉内皮细胞增殖有重要的影响。
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