论文摘要
高凝状态（prothrombotic states,PTS）是心脑血管疾病发生的重要机制。肝脏在PTS的形成和发展过程中起着十分重要的作用,为研究肝脏在PTS中的作用及其机制,方定志等构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因消减cDNA文库,并对该文库进行了初步筛选,获得大鼠肝脏PTS相关基因的阳性克隆cDNA。为了筛选到人肝脏PTS相关基因的全长cDNA序列,进一步探讨肝脏在PTS中的作用及其机制,本研究以PTS大鼠肝脏差异表达基因cDNA为探针,采用噬菌斑原位杂交法筛选人肝脏cDNA文库。 以本室建立的PTS大鼠肝脏差异表达基因消减cDNA文库中带有目的cDNA的质粒为模板,采用PCR方法扩增目的片段;以纯化PCR产物作探针,用噬菌斑原位杂交法筛选人肝脏cDNA文库,经初筛、二筛和三筛后,将获得的阳性克隆转入E.coli BM 25.8,使λ TripIEx环化成质粒pTripIEx,经酶切鉴定后进行DNA测序。 从人肝脏cDNA文库中筛选获得4条全长cDNA序列,经序列测定及生物信息学分析发现,其中3条cDNA序列分别与纤维蛋白原γ的mRNA、肝脏纤维蛋白原相关基因1(liver fibrinogen-related gene-1,
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