论文摘要
背景:自1986年Chen冻存人卵成功10余年来,学者们虽对卵子冷冻做了大量工作,但进展缓慢,人们一直在寻求简便、经济、高效的卵子冷冻方法。采用程序化冷冻法,细胞内容易形成冰晶,损伤细胞膜系统。而玻璃化冷冻法是采用高浓度的冷冻保护剂,在快速冷冻过程中,形成一种极其黏稠的无结构的玻璃样状态,有效的避免了卵母细胞内冰晶的形成。玻璃化冷冻法不仅操作简单,而且省时,不需要昂贵的仪器,为卵子冷冻带来了希望。而且,玻璃化冷冻在原有方法的基础之上不断地改进,追求冷冻保护液的低毒,为了加速降温和复温速率,人们不断地在载体上进行改进,如OPS法,是通过减小管腔和管壁厚度,且仅吸入1-2μL含卵冷冻保护液,使冷冻速率达到20000℃/分。尽管如此,由于卵子冷冻技术的不成熟,它仍然没有成为一项常规的治疗手段而应用于临床。目的:本实验通过建立小鼠实验模型,比较程序化和OPS玻璃化冷冻效果,探讨卵子冷冻的具体方法,为卵子冷冻技术应用于临床提供实验依据。方法:通过促超排卵获取小鼠MⅡ期卵母细胞,随机分组,观察不同冷冻方法、高浓度的冷冻保护液,对卵子的成活及进一步发育潜能的影响;不同的IVF前培养时间冻融卵子的受精及继续发育的影响。结果:1.OPS玻璃化冷冻组与程序化冷冻组的存活率、受精率、卵裂率及6-8cell胚形成率均无显著性差异,但OPS组无论成活率,还是受精率、卵裂率及6-8cell胚形成率,均稍高于程序化冷冻组。2.玻璃化冷冻组与暴露组的卵母细胞存活率分别为35.3%,100%,有极显著性差异（P<0.05）。暴露组与对照组比较的受精率、卵裂率,无显著性差异（P>0.05）,但前者低于后者。而暴露组与对照组的6-8cell胚形成率分别为41%,63%,两组比较,有显著性差异（P<0.05）。3.玻璃化冷冻法和程序化冷冻法,冻融后的培养2h组和培养1h组的受精率分别为52.4%vs13.6%,60%vs24%,无论哪种冷冻方法,两组比较,均有显著性差异（ P< 0.05）。冻融后培养2h组和培养1h组的卵裂率分别为72.7%vs33.3%,88.9%vs33.3%,两组比较,有显著差异,玻璃化冷冻法和程序化冷冻法的1h组的6-8cell胚形成率均为0;2h组的6-8cell胚形成率分别为28.6%,43.8%,两组比较,无显著性差异（P>0.05）但前者低于后者。结论:1.本实验证实,OPS玻璃化冷冻法至少可以达到程序化冷冻法同样的效果,而OPS玻璃化冷冻法有好于程序化冷冻法的趋势。加之,其简便、省时、经济等优点,因而,更有发展前景。2.卵母细胞经高渗液的冷冻前平衡和解冻后恢复处理后可以暂时存活,但由于渗透压的急剧变化,对其进一步的发育能力是有影响的。3.无论是程序化冷冻法还是OPS玻璃化冷冻法,要获得较好的效果,冻融后卵子的IVF前培养时间至少需2小时,这可能与解冻后纺锤体需要时间恢复有关。