竞技运动员骨健康保护与杜仲叶防治OP分子机理研究

论文摘要

目的:为竞技运动员提供安全有效的护骨类功能食品与研制高效防治运动性骨质疏松症的杜仲类中成药提供理论基础。从细胞水平与分子水平研究杜仲叶提取物对大鼠成骨细胞生长的影响和对肾细胞分泌护骨素（OPG）的影响,探讨药食两用的杜仲叶多靶位防治骨质疏松症的分子机理。方法:①分析比较竞技运动员骨组织健康状况与运动性骨质疏松症的发生;②杜仲叶提取物——从新鲜杜仲叶获得提取液,制备杜仲叶浸膏;③细胞培养——在体外培养的大鼠成骨细胞和肾细胞中加入不同浓度的杜仲提取物作用96h,采用双抗体夹心ABC-ELISA法对肾细胞分泌的OPG和成骨细胞分泌的破骨细胞分化因子（RANKL）、骨钙素（OC）、Ⅰ型胶原（COLL-Ⅰ）的浓度进行测定;对体外培养的成骨细胞和肾细胞进行1:1和1:2的混合培养,加入不同浓度的杜仲提取物,采用MTT法测定细胞的增殖情况。④分子水平研究——分别对加入最佳浓度杜仲叶提取物作用的成骨细胞和肾细胞OPG mRNA进行RT-PCR,检测mRNA的转录量。结果:体外培养成骨细胞在不同浓度杜仲叶提取物的作用下,分泌RANKL、OC、COLL-Ⅰ都有区别,和空白组进行对照有显著性差异。利用RT-PCR检测OPG的mRNA转录量,加药组比空白组的转录量更高;体外培养肾细胞在杜仲叶提取物不同浓度的作用下,OPG的分泌量不同,和空白组相比有显著性差异。混合培养的最佳比例是成骨细胞:肾细胞为2:1,这样更能促进成骨细胞的生长。MTT的检测说明不同浓度杜仲叶提取物对细胞生长的作用不同,在10-4g/ml、10-5g/ml、10-6g/ml这三个浓度中,表现出作用效果的剂量依赖性。对成骨细胞作用最明显的剂量是10-5g/ml。对肾细胞作用最明显的剂量是10-4g/ml,而10-3g/ml反而会抑制细胞的生长。结论:杜仲叶提取物对成骨细胞和肾细胞具有明显的作用,可协同调节骨代谢过程。是一种多靶点发挥成骨作用的药食两用的道地中药材。它降低破骨细胞的活性,增加骨密度,促进骨重建,有效防治骨质疏松症。是研制竞技运动员的护骨性功能食品与防治运动性骨质疏松症的药物的理想原料之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言（Introduction）
• 2 研究依据（Research Evidence）
• 2.1 运动对骨组织结构的影响
• 2.1.1 适当运动对骨组织结构的影响
• 2.1.2 过度训练（Overtrianing,OT）对骨组织结构的影响
• 2.2 运动时主要器官功能与骨代谢的关系
• 2.2.1 运动时心脏与骨代谢的关系
• 2.2.2 运动时肾脏与骨代谢的关系
• 2.2.3 运动时性腺与骨代谢的关系
• 2.2.4 运动时免疫系统与骨代谢的关系
• 2.3 竞技运动员的骨组织保健
• 2.4 杜仲叶的化学成分及其作用
• 2.5 骨质疏松的分子机理
• 2.6 体外成骨细胞分离与培养技术
• 2.7 体外肾细胞分离与培养技术
• 2.8 混合培养技术
• 3 研究目的与意义（Intention and Significance）
• 4 研究的创新之处（Research Innovation）
• 5 实验研究与结果（Experiment Design and Results）
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 主要实验仪器设备
• 5.1.2 主要药品及试剂
• 5.1.3 实验动物及杜仲叶
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 所需器具清洗与消毒
• 5.2.2 试剂配置
• 5.2.3 杜仲叶浸膏的制备
• 5.2.4 杜仲叶提取物实验溶液配制
• 5.2.5 成骨细胞培养
• 5.2.6 肾细胞培养
• 5.2.7 培养细胞染色（苏木精—伊红染色）
• 5.2.8 培养成骨细胞与肾细胞形态结果
• 5.2.9 MTT检测与结果
• 5.2.10 OPG、RANKL、OC、COLL-1检测与结果
• 5.2.11 成骨细胞与肾细胞总RNA的提取及OPG mRNA的RT-PCR结果
• 5.2.11.1 成骨细胞总RNA的提取及OPG mRNA的RT-PCR结果
• 5.2.11.2 肾细胞总RNA的提取及OPG mRNA的RT-PCR结果
• 6 讨论（Discussion）
• 6.1 中草药防治骨质疏松症的研究
• 6.2 关于长期大强度运动导致骨疾病的思考
• 6.3 对于细胞培养和检测方法的选择
• 6.4 杜仲叶提取物对成骨细胞生长与代谢的影响
• 6.5 杜仲叶提取物对肾细胞生长与代谢的影响
• 6.6 成骨细胞与肾细胞混合培养的研究
• 6.7 杜仲叶提取物防治骨质疏松症机理的思考
• 7 结论（Conclusion）
• 8 实验建议和展望（Advice and Prospect）
• 参考文献（References）
• 致谢（Acknowledgements）