恩诺沙星在锦鲤体内残留与消除规律的研究

论文摘要

我国是水产品生产和出口大国,近十年来出口量一直都位居世界首位,但是许多养殖场为了提高经济效益,盲目地加大放养密度和投饵量,引起水质恶化,并且诱发各种水产疾病。因此,了解水产药物在水产品中的代谢规律是很有必要的,可以对水产养殖中的合理用药提供有效的理论依据。本文研究了不同浓度与不同给药方式下恩诺沙星在锦鲤体内的不同组织的消除代谢情况,以及不同浓度恩诺沙星对锦鲤各组织脂酶同工酶的影响。在20-26℃条件下,内服组以每千克饲料添加2、4、6、8和10g恩诺沙星拌饵投喂,连续投喂15d；浸泡组以每升水中添加5、10、15、20和25mg恩诺沙星浸泡鱼体,连续浸泡15d,期间投喂经测定为含有恩诺沙星的空白饲料。15d后投喂空白饲料,分别于停药后0、15、30、45、60和75d后取锦鲤肌肉、肝胰脏和肾脏测定其恩诺沙星的残留量。用反相高效液相色谱-固相萃取法测定组织中的恩诺沙星含量,以不同pH的磷酸二氢钾溶液提取,C18柱纯化,流动相为磷酸三乙胺与乙腈（82：18）,外标法定量。研究结果表明,内服组中,随着投喂浓度的升高,恩诺沙星在各个组织中的残留量在不断增加,在各个组织的半衰期也增长,但是在10g/kg饲料组中较为反常。在浸泡组中,恩诺沙星的残留量呈现先上升后下降的趋势,在30-45d左右达到峰值,而且药效不容易控制。比较不同浓度不同给药方式的恩诺沙星在不同组织的消除代谢曲线,建议在水产养殖中以每千克饲料添加2-6g恩诺沙星,拌饵投喂为宜。2g/kg饲料组肌肉、肝脏和肾脏的消除代谢方程分别为C=2.0976e-00284t、C=1.0074e-00208t和C=3.4493e-00255t,半衰期分别为50.49d、50.19 d和86.96d；4g/kg饲料组肌肉、肝脏和肾脏的消除代谢方程分别为C=2.0262e-0.005t、C=5.3712e-0.0244t和C=5.6363e-0.0252t,半衰期分别为89.86d、97.30d和96.13；6g/kg饲料组肌肉、肝脏和肾脏的消除代谢方程分别为C=4.5666e-0.0089t、C=4.2835e-0.0247t和C=8.871e-0.0189t,半衰期分别为148.53d、115.29d和152.17d。结果显示,恩诺沙星在锦鲤体内不易消除,半衰期长。因此建议,水产养殖中因根据投喂浓度的不同制定休药期,休药期应不少于107d。本试验结果显示,恩诺沙星进入锦鲤体内大部分都是以原药的方式存在,但是在各个组织中都可以检测到其代谢产物环丙沙星的存在,只是含量相对较低。所以环丙沙星在水产中被列为禁药值得商榷。采用不连续聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳,4%分离胶,7%浓缩胶,分析恩诺沙星处理后,锦鲤肝胰脏、肾脏、肠、脾脏、肌肉、心脏和胆囊等组织中脂酶同工酶的变化情况。结果表明,恩诺沙星处理后,锦鲤个组织的脂酶同工酶与对照组相比表现出不同的差异性,这又以肠中最为明显,尤其是Ⅲ区中的酶带。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第1章 文献综述
• 1.1 我国渔用药物使用现状及存在的问题
• 1.1.1 我们的水产养殖与鱼药使用现状
• 1.1.2 我国渔用药物发展存在的问题及对策
• 1.1.3 我国对渔药发展的对策
• 1.2 喹诺酮类药物的特性以及在水产养殖生产中的应用
• 1.2.1 喹诺酮类药物的特性
• 1.2.2 喹诺酮类药物的种类及发展
• 1.2.3. 常用检测喹诺酮类药物的方法
• 1.2.4 喹诺酮类药物在渔业中的使用现状
• 1.2.5 喹诺酮类药物的使用注意事项及药物间的相互作用
• 1.2.6 喹诺酮类药物的停药期
• 1.2.7 喹诺酮类药物的药物残留限量
• 1.3 恩诺沙星以及恩诺沙星的研究现状
• 1.3.1 恩诺沙星的特性
• 1.3.2 恩诺沙星在各种水产品养殖的用法与使用剂量
• 1.3.3 恩诺沙星的研究进展
• 1.3.4 我国对恩诺沙星最大残留量（MRLs）的规定
• 第2章 恩诺沙星在锦鲤体内代谢规律的研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 仪器和设备
• 2.2.2 实验材料
• 2.2.3 实验方法
• 2.3 样品中恩诺沙星残留量的测定
• 2.3.1 取样
• 2.3.2 试剂和材料
• 2.3.3 样品的前处理
• 2.3.4 样品的纯化
• 2.3.5 恩诺沙星和环丙沙星标准曲线的制备
• 2.3.6 回收率的测定
• 2.3.7 恩诺沙星的测定
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 恩诺沙星和环丙沙星的标准曲线及标准品色谱图
• 2.4.2 恩诺沙星与环丙沙星的回收率
• 2.4.3 内服组饲料中恩诺沙星的含量和色谱图
• 2.4.4 内服组肌肉中恩诺沙星的代谢规律以及其色谱图
• 2.4.5 内服组肝脏中恩诺沙星的代谢规律
• 2.4.6 内服组肾脏中恩诺沙星的代谢规律
• 2.4.7 内服组中恩诺沙星的代谢方程以及相关参数
• 2.4.8 浸泡组肌肉中恩诺沙星的代谢规律
• 2.4.9 浸泡组肝脏中恩诺沙星的代谢规律
• 2.4.10 浸泡组肾脏中恩诺沙星的代谢规律
• 2.5. 讨论
• 2.5.1 恩诺沙星锦鲤体内的代谢产物
• 2.5.2 内服组恩诺沙星的代谢规律
• 第3章 恩诺沙星对锦鲤脂酶同工酶的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 锦鲤各组织酯酶同工酶酶谱分析
• 3.3.2 恩诺沙星处理后锦鲤各组织酯酶同工酶酶谱分析
• 3.4 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果