铀矿尘致HBE细胞凋亡及其相关机制的研究

论文摘要

目的：应用人正常支气管上皮（HBE）细胞体外培养，探讨铀矿尘诱导人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡作用，以及铀矿尘诱导HBE细胞凋亡过程中的机制。方法：本研究以人正常支气管上皮细胞（HBE细胞）为模型，采用MTT法检测铀矿尘对细胞毒性；采用H.E染色法观察细胞形态学改变；采用紫外分光光度计法检测细胞培养上清液中LDH、AKP和GOT含量观察铀矿尘对细胞膜的损伤作用；采用AO/EB双荧光染色法和流式细胞术（FCM）检测铀矿尘对细胞凋亡的影响；采用FCM技术检测细胞周期的改变；采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白的表达。结果：1.不同浓度铀矿尘对HBE细胞的细胞毒性MTT检测法分析法的结果显示：铀矿尘组作用于细胞12h，在25μg/mL至200μg/mL浓度范围内，随铀矿尘作用浓度的增加，HBE细胞的存活率逐渐降低。采用H.E染色法，光学显微镜下观察铀矿尘作用于HBE细胞12h后，细胞形态学改变显示出凋亡的特征样表现。铀矿尘可使HBE细胞培养上清液中LDH、AKP、GOT含量增加，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01），且随铀矿尘染毒浓度增加，LDH、AKP、GOT在细胞外液的含量也逐渐增高。2.铀矿尘对HBE细胞凋亡的影响采用AO/EB染色法观察铀矿尘对HBE细胞凋亡的作用，结果显示：铀矿尘作用于HBE细胞12h后，随铀矿尘作用浓度（25、50、100和200μg/mL）的增加，绿色荧光的强度逐渐减弱，橘红色荧光逐渐增加，红色的坏死细胞增多。并且凋亡率随铀矿尘作用浓度的增加是逐渐的增高。采用PI单染FCM检测细胞周期进程的变化。结果显示：不同浓度（25、50、100和200μg/mL）铀矿尘作用于HBE细胞12h后，细胞周期发生改变，各剂量组G2/M期细胞比例则增高。采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白的表达，结果显示：铀矿尘作用于HBE细胞12h后，随铀矿尘作用浓度的增加，Bcl-2和Bax蛋白表达有上升的趋势，而Bcl-2/Bax比值有下降的趋势；各铀矿尘组Cyt C、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达，随作用浓度的增加，其阳性表达有上升的趋势。结论：1.铀矿尘对HBE细胞产生毒性主要表现在可抑制HBE细胞增殖，使细胞形态发生改变，对HBE细胞膜具有损伤作用。2.铀矿尘可诱导HBE细胞凋亡主要表现在可引起HBE细胞周期发生改变及其HBE细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cyt C、 Caspase-3及Caspase-9）表达增加，其中以Caspase-9蛋白增加最为明显，凋亡主要与线粒体途径有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 3 铀矿尘诱导 HBE 细胞凋亡的检测
• 4 统计学处理
• 结果
• 1 铀矿尘对HBE细胞产生的毒性作用
• 2 铀矿尘致HBE细胞凋亡的检测
• 讨论
• 1 不同浓度铀矿尘对HBE细胞的细胞毒性
• 2 铀矿尘对HBE细胞凋亡的影响
• 结论
• 参考文献
• 主要英文缩略语索引
• 综述
• 参考文献
• 研究生学习期间发表的论文
• 致谢