唐古特青兰抗菌、抗病毒活性以及有效部位研究

论文摘要

本论文系统的对二十五味鬼臼丸的抗菌活性、以及唐古特青兰的抗菌和抗病毒药理作用进行了研究,并首次采用HSV-2小鼠脑炎模型对唐古特青兰体外抗病毒作用进行了评价。并在此基础上,采用综合分离技术对唐古特青兰的抗菌有效成份进行分析测定,为开发这种新的抗菌药物提供了实验依据。抗菌药理研究结果表明:唐古特青兰水提物对几种菌的抑制作用都不强,黄酮成分的效果最好,挥发油次之。并采用GC-MS分析了唐古特青兰的挥发油成分,其挥发油中主要含有的物质是萜类以及脂肪烃类物质,萜类又分为倍半萜和单萜。其中含量最多的成分为反式-松香芹醇醋酸酯（25.18%）、桉树脑（10.9%）、正庚烷（7.82%）邻氨苯甲酸,1,5-二甲基-1-乙烯基-4己烯酯（5.8%）以及(1S,2S,3R,5S-（+）-蒎二醇（5.14%）。抗病毒药理结果显示阻止病毒颗粒侵入细胞和对HSV-2病毒的直接杀灭作用是唐古特青兰的主要作用方式,其中唐古特青兰总浸膏对病毒直接杀灭作用的TI值达到11.3。并且选用HSV-2脑炎模型小鼠作为研究对象,检测唐古特青兰对病毒脑炎小鼠的治疗效果。结果显示唐古特青兰总浸膏中剂量明显优于高、低剂量组,并且比ACV的效果要好;各剂量组均能延长小鼠的平均存活天数。本论文将唐古特青兰黄酮水解为黄酮苷元,通过正交实验筛选出最佳条件,然后测定了抑菌效果,并通过HPLC-MS分析了水解后黄酮的主要成分。正交实验水解条件中盐酸的浓度为主要因素,水解时间为次要因素。由正交实验结果得到黄酮水解的最佳工艺条件为:A3B1C1D2即使用3mol/l的盐酸,50%的甲醇混合溶液30ml,在85℃水解1h,起抑菌效果最佳。HPLC-MS分析结果发现,唐古特青兰黄酮的主要成分为异香槐素（16.34%）、金雀花苷（30.94%）、洋艾素（1.58%）、3′,5,5′-三羟基-3,4′,6.7-四甲基黄酮（23.14%）、3′,4′-二甲氧黄酮（14.18%）,这几种物质的总含量占到唐古特青兰黄酮含量的86.16%。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 1.藏医药简介
• 1.1 藏药的历史及资源分布现状
• 1.2 藏药的开发利用现状
• 1.3 藏药药理研究进展
• 2.藏药物二十五味鬼臼丸和唐古特青兰药理研究
• 2.1 二十五味鬼臼丸药理作用
• 2.2 唐古特青兰药理研究
• 2.3 抗菌、抗病毒有效成分研究
• 2.3.1 抗菌有效成分研究
• 2.3.2 抗HSV病毒有效成分研究
• 3 立论依据
• 第二部分 唐古特青兰、二十五味鬼臼丸抗菌活性及活性成分研究
• 1.实验材料
• 1.1 供试药物
• 1.2 供试菌种
• 1.3 培养基及试剂
• 1.4 实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 单味藏药唐古特青兰以及复方藏药二十五味鬼臼丸的抗菌实验
• 2.2 GC/MS测定挥发油成分实验
• 3.数据处理
• 4.实验结果
• 4.1 单味藏药抑菌作用的筛选结果
• 4.2 藏药复方二十五味鬼臼丸抑菌作用的筛选结果
• 第三部分 唐古特青兰抗HSV-2型病毒的研究
• 1 实验材料
• 1.1 药材及其提取物之的制备
• 1.2 实验细胞、病毒和动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 药物对细胞毒性的测定
• 2.2 病毒噬斑抑制分析
• 50)测定'>2.3 唐古特青兰的半数致死量(LD₅₀)测定
• 2.4 唐古特青兰总提取物对脑腔接种病毒小鼠的治疗效果
• 3 实验结果
• 3.1 药物对细胞毒性
• 3.2 唐古特青兰提取物阻止HSV-2病毒颗粒对靶细胞的吸附
• 3.3 唐古特青兰提取物对HSV-2病毒的直接杀灭作用
• 3.4 唐古特青兰提取物对HSV-2侵入Vero细胞的阻断作用
• 3.5 唐古特青兰提取物对HSV-2病毒颗粒生物合成的抑制作用
• 3.6 唐古特青兰总浸膏对脑腔感染病毒小鼠的存活率和存活时间的影响
• 4 讨论
• 第四部分 唐古特青兰成分实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 唐古特青兰的生药鉴定
• 1.1.1 性状鉴别
• 1.1.2 显微鉴别
• 1.1.3 理化鉴别
• 2.化学成分预实验方法
• 2.1 供试液的制备
• 2.2 成分研究
• 2.3 薄层层析
• 2.4 结果分析
• 第五部分 唐古特青兰抗菌活性成分研究
• 1.实验材料
• 2.仪器与试剂
• 2.1 仪器
• 2.2 试剂
• 3.实验方法
• 3.1 提取
• 3.2 分离
• 3.3 各部分化学成分定性分析
• 3.4 抑菌实验
• 4.实验结果
• 4.1 提取流程图
• 4.2 分离
• 4.3 化学成分定性实验
• 4.4 抑菌实验结果
• 5 讨论
• 第六部分 唐古特青兰黄酮水解条件筛选及其指纹图谱
• 1.实验材料
• 2.仪器与试剂
• 2.1 仪器
• 2.2 试剂
• 3.实验方法
• 3.1 唐古特青兰黄酮提取物酸水解流程图
• 3.2 正交试验设计
• 3.4 抑菌实验
• 3.5 HPLC-MS测定黄酮成分实验
• 3.5.1 黄酮样品制备
• 3.5.2 HPLC-MS联用分析条件
• 4.实验结果
• 4.1 正交实验结果及分析
• 4.2 水解后黄酮抑菌实验结果图示
• 4.3 HPLC-MS实验结果
• 4.3.1 样品检测结果
• 4.3.2 色谱峰的辨认结果
• 第七部分 结论
• 7.1 二十五味鬼臼丸及唐古特青兰抗菌活性
• 7.2 唐古特青兰抗病毒活性
• 7.3 唐古特青兰抑菌活性成分的研究
• 参考文献
• 致谢
• 实验动物质量合格证