论文摘要
目的：RUNX3（PEBP2aC／CBFA3／AML2）为新近克隆的一个候选抑癌基因。研究表明该基因在人类多种肿瘤中存在甲基化异常，而肝癌中该基因的表达情况尚处于探索阶段。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR）诱导人肝癌细胞系HepG2因高甲基化失活的RUNX3基因的再表达及对该肿瘤细胞生物学行为和药物敏感性的影响。方法：以不表达RUNX3基因的人肝癌细胞系HepG2为靶细胞，分为不加任何处理的对照组和5-Aza-CdR处理组。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测抑癌基因RUNX3 mRNA表达水平的改变：MTT比色法观察细胞的生长活性及对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）和阿霉素（adriamycin，ADM）IC50值的影响；平板克隆试验检测细胞对5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）的敏感性；流式细胞仪（FCM）测定细胞周期及阿霉素（adriamycin，ADM）累积率；透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果：对照组HepG2细胞未能检测到RUNX3基因mRNA表达，而经0.1、5.0μmol／L5-Aza-CdR处理后，RUNX3 mRNA可见再表达。5-Aza-CdR可时间、浓度依赖性地抑制HepG2细胞增殖（P＜0.05），相关系数（γ）别为γ24h=0.894，γ48h=0.973，γ72h=0.967，24、48和72 h的IC50分别为87.5、84.7和59.0μmol／L。经5-Aza-CdR处理后，电镜显示HepG2细胞为早期凋亡形态学改变。分别采用为5.0和10.0gmol／L浓度的5-Aza-CdR处理HepG2细胞72 h，与对照组相比，其S期细胞增多，而G1期细胞减少，提示细胞发生S期阻滞。MTT试验显示5-Aza-CdR处理组细胞5-FU及阿霉素的IC50比对照组明显降低（P＜0.05），且前者的胞内阿霉素荧光强度显著高于后者（P＜0.05），即阿霉素的细胞内累计率上升。结论：去甲基化制剂5-Aza-CdR能有效地激活肝癌细胞系HepG2因高甲基化所致RUNX3基因沉默的再转录，诱导该基因的表达，从而抑制肿瘤细胞生长，使其凋亡增加，并增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性。