我国发现携带插入序列IS1203变种的志贺毒素2基因的大肠杆菌O157：H7

论文摘要

肠出血性大肠杆菌（Enterohaemorrhagic Escherichia coli,EHEC）O157:H7 与出血性肠炎、溶血性尿毒综合征和血小板减少性紫癫这些传染性疾病密切相关。志贺毒素（也称作 Vero 细胞毒素）是大肠杆菌O157:H7 重要的致病性毒力因子,具有强烈的细胞毒性。志贺毒素分为志贺毒素 1 和志贺毒素 2 两大家族,每个家族又可分为众多变种。大肠杆菌 O157:H7 携带的志贺毒素型别与所致人类疾病的发展进程密切相关。我国 1987 年首次从腹泻患者标本中分离到了肠出血性大肠杆菌 O157:H7,1999 年和 2000 年在苏、皖两省发生了肠出血性大肠杆菌O157:H7 引起的暴发,期间又从部分地区的环境及动物中陆续分离到肠出血性大肠杆菌 O157:H7。我国肠出血性大肠杆菌 O157:H7 的流行情况值得重要关注和更多研究。 为了探索我国肠出血性大肠杆菌 O157:H7 感染的流行病学情况,我们采用了聚和酶链反应、核苷酸序列测定等方法,对 1992-2002 年我国部分地区（主要是曾经暴发过 O157:H7 感染的苏、皖两省）分离到的 289 株产志贺毒素的大肠杆菌 O157:H7 所携带的志贺毒素基因型别进行了分析。我们发现了一种新型的志贺毒素 2 基因存在于 3 株大肠杆菌 O157:H7 中,其中编号为 02F044 和 99B113 的 2 株大肠杆菌·2·O157:H7 均分离自江苏羊粪标本,编号为 9 的 1 株大肠杆菌 O157:H7分离自安徽猪粪标本。经过核苷酸序列测定和序列比较分析发现,这种新型的志贺毒素 2 基因均有一长度为 1313bp 的插入片段,导致长度为 1241bp 的野生型志贺毒素 2 基因增长为 2554bp。该插入片段包括一长度为 1310bp 的插入序列（insertion sequence,IS）和因插入产生的长度为 3bp 的同向重复序列（direct repeat , DR）。除这段 3bp 的同向重复序列外,这三段长 1310bp 插入序列完全一致,与 1999 年日本报道的插入在志贺毒素2基因中的插入序列1203变种（insertion sequence 1203variant,IS1203v）（stx2::IS1203v）有 100%的序列同源性。这是首次在我国发现携带 stx2::IS1203v 的大肠杆菌 O157:H7 菌株。此外,IS1203v在这 3 株菌的志贺毒素 2 基因中的插入位置各不相同,而且其中大肠杆菌 02F044 和 9 的 IS1203v 的开放性读码框与各自 Stx2 A、B 亚单位的开放性读码框方向相反,另一株大肠杆菌 99B113 的 IS1203v 的开放性读码框与 Stx2 A、B 亚单位的开放性读码框方向相同。提示 IS1203v的插入可能引起志贺毒素 2 的在产量或活性功能的改变。此外,对这 3 株携带 stx2::IS1203v 的大肠杆菌 O157:H7 进行常规方法制备志贺毒素 2 并对其制备的产物进行 HeLa、Vero 细胞毒试验分析,将测定 HeLa、Vero 细胞乳酸脱氢酶释放量做为志贺毒素 2 细胞毒性的一个指示。我们发现这用这 3 株菌的志贺毒素 2 制备产物对 HeLa和 Vero 细胞均能产生致细胞病变作用的形态学改变。志贺毒素 2 的制备产物对细胞乳酸脱氢酶释放量的结果显示,在 18 小时内,大肠杆菌02F044、99B113 和 9 志贺毒素 2 的制备产物分别对 HeLa 细胞产生了25.16%、26.08%、26.07%的乳酸脱氢酶释放量,比仅携带志贺毒素 2的阳性对照菌株 51.62%的乳酸脱氢酶释放量低;对 Vero 细胞分别为31.15%、30.31%、31.32%,也低于阳性对照菌株 40.53%的乳酸脱氢酶释放量。提示 IS1203v 的插入对志贺毒素 2 的活性有所影响。经统计学分析显示,3 株菌志贺毒素 2 的制备产物对 HeLa 细胞乳酸脱氢酶释放的值均低于仅携志贺毒素 2 的大肠杆菌 O157:H7 阳性对照菌株（P<0.05）;但对 Vero 细胞而言,3 株菌志贺毒素 2 的制备产物的乳酸脱氢酶释放的值与仅携志贺毒素 2 的大肠杆菌 O157:H7 阳性对照菌株

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢