类ACE活性抑制肽的制备及其性质研究

论文摘要

ACE可以通过一系列的生理反应，从而起到使血压升高的作用。ACE活性抑制肽可以抑制ACE的功能，使血压降低，因其降血压效果明显且对正常血压无影响、毒副作用小而成为活性肽研究的热点。研究此类活性肽与DNA的相互作用以及对其体外抑制活性的检测，不仅对阐明DNA的结构和功能具有重要意义，而且对于进一步阐明ACE活性抑制肽药物的作用机制、ACE活性抑制肽的构效关系以及此类药物的设计和体外筛选都具有重要意义。本论文采用固相Fmoc法合成了八种具有ACE活性抑制肽部分结构特征的寡肽粗产品。利用反相高效液相法对粗肽产品进行分析、分离，分别制备出了八种具有较高纯度的寡肽产品，并利用ESI-MS对其进行了表征。通过紫外光谱法、荧光光谱法和黏度法对七种类ACE活性抑制肽与DNA的相互作用进行了考察。实验结果发现，YKYY, WVYY, YYAAY, YGAYAP, YGAYKP, YGAYVY与DNA主要作用模式是部分嵌入方式；YYKAF与DNA的主要作用模式是静电结合。DNA对七种类ACE活性抑制肽的荧光猝灭都是静态猝灭。由荧光光谱实验数据计算得到YKYY与DNA的结合常数为1.0×104L·mol-1；WVYY与DNA的结合常数为8.3×103L·mol-1；YYAAY与DNA的结合常数为2.7×105L·mol-1；YYKAF与DNA的结合常数为2.78×103L·mol-1；YGAYAP与DNA的结合常数为1.7×103L·mol-1；YGAYKP与DNA的结合常数为3.9×103L·mol-1；YGAYVY与DNA的结合常数为7.61×104L·mol-1。比较七种肽与DNA的结合常数，它们与DNA的作用力由大到小依次是YYAAY、YGAYVY、YKYY、WVYY、YGAYKP、YYKAF、YGAYAP，从而可以看出肽序列中极性芳香性的氨基酸残基越多，它与DNA的作用力就越大。采用高效液相色谱法对八种肽PAY、YKYY、WVYY、YYAAY、YYKAF、YGAYAP、YGAYKP、YGAYVY对ACE的活性抑制进行了检测，从八种肽对ACE活性的抑制率可以看出，序列中芳香性氨基酸残基的含量越多，其对ACE的活性抑制作用也就越强，但也有例外如YYAAY；对于结构相似的肽序列，带有较长支链以及疏水性氨基酸的增加可增强其抑制活性，而且序列中带有正电荷氨基酸残基的增加也可能增强其抑制作用；当N-末端氨基酸固定，C-末端氨基酸变化时的肽对ACE抑制活性变化较大。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 ACE 活性抑制肽的研究进展
• 1.1.1 ACE 活性抑制肽的作用机制
• 1.1.2 ACE 抑制肽的结构特点
• 1.1.3 ACE 活性抑制肽活性检测
• 1.2 ACE 活性抑制肽的固相合成
• 1.3 固相合成的 ACE 活性抑制肽的分离纯化方法
• 1.3.1 薄层色谱（TLC）
• 1.3.2 高效毛细管电泳（HPCE）
• 1.3.3 离子交换色谱法（IEXC）
• 1.3.4 反相高效液相色谱（RP-HPLC）
• 1.4 ACE 活性抑制肽的分析方法
• 1.4.1 质谱分析（Mass Spectrometry，MS）
• 1.4.2 核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）
• 1.5 生物小分子与 DNA 的相互作用
• 1.5.1 生物小分子与 DNA 相互作用的作用模式
• 1.5.2 生物小分子与 DNA 相互作用的研究方法
• 1.5.2.1 紫外可见吸收光谱法
• 1.5.2.2 荧光光谱法
• 1.5.2.3 粘度法
• 1.5.2.4 凝胶电泳法
• 1.5.2.5 其它方法
• 1.6 本课题的选题意义及主要内容
• 第二章 类 ACE 活性抑制肽的制备
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器和试剂
• 2.1.3 实验方法
• 2.1.3.1 YKYY 四肽的合成
• 2.1.3.2 一系列类 ACE 活性抑制肽的合成
• 2.1.3.3 肽的 RP-HPLC 色谱分析条件
• 2.1.3.4 肽的质谱分析条件
• 2.1.3.5 肽的分离纯化
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 八种类 ACE 活性抑制肽的 RP-HPLC 色谱分析及质谱表征
• 2.2.2 八种肽的分离纯化
• 2.3 本章小结
• 第三章 类 ACE 活性抑制肽与 DNA 的相互作用
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 仪器和试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.2.1 溶液的配制
• 3.1.2.2 紫外光谱法研究肽与 DNA 的相互作用
• 3.1.2.3 荧光光谱法研究肽与 DNA 的相互作用
• 3.1.2.4 粘度法研究肽与 DNA 的相互作用
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 YKYY, WVYY 四肽与 DNA 相互作用的研究
• 3.2.1.1 紫外光谱法研究 YKYY, WVYY 四肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.1.2 荧光法研究 YKYY, WVYY 四肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.1.3 黏度法研究 YKYY, WVYY 四肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.2 YYAAY, YYKAF 五肽与 DNA 的相互作用研究
• 3.2.2.1 紫外光谱法研究 YYAAY, YYKAF 五肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.2.2 荧光法研究 YYAAY, YYKAF 五肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.2.3 黏度法研究 YYAAY, YYKAF 五肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.3 YGAYAP, YGAYKP, YGAYVY 六肽与 DNA 的相互作用研究
• 3.2.3.1 紫外光谱法研究 YGAYAP, YGAYKP, YGAYVY 六肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.3.2 荧光法研究 YGAYAP, YGAYKP, YGAYVY 六肽与 DNA 的相互作用
• 3.2.3.3 黏度法研究 YGAYAP, YGAYKP, YGAYVY 六肽与 DNA 的相互作用
• 3.3 本章小结
• 第四章 高效液相色谱法测定 ACE 活性抑制肽的活性
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 仪器和试剂
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.2.1 溶液的配制
• 4.1.2.2 高效液相色谱法测定 ACE 活性抑制肽的活性的色谱条件
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 高效液相色谱法测定 ACE 活性抑制肽的活性原理
• 4.2.2 检测波长的确定
• 4.2.3 HHL 及马尿酸溶液保留时间的确定
• 4.2.4 标准曲线的绘制
• 4.2.4.1 不同浓度的马尿酸的峰面积的测定
• 4.2.4.2 标准曲线的绘制
• 4.2.5 八种类 ACE 活性抑制肽溶液保留时间的确定
• 4.2.6 空白对照溶液的液相分析
• 4.2.7 反应液的液相分析
• 4.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历