论文摘要
鹅副粘病毒（Goose Paramyxovirus，GPMV）与新城疫病毒（New castle disease virus，NDV）基因核苷酸同源性来看，GPMV与NDV属于同种病毒，GPMV是NDV的一个变异，而不是一个新种病毒，是NDV毒株在水禽上引起发病，且病毒毒力加强。但是，GPMV与传统的NDV又有不同，差异主要在血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）及融合蛋白（Fusion protein，F）上，常规的NDV疫苗不能提供有效的保护，因此从分子生物学水平上对该病进行研究具有重要的意义。HN和F蛋白是GPMV诱导体液免疫的重要靶抗原，在抗病毒免疫中起着重要作用，无疑HN和F基因已成为研制GPMV基因工程苗及免疫监测试剂的首选基因。本试验根据GenBank所发表的HN及F基因的cDNA序列，利用Primer5.0软件，参照昆虫细胞杆状病毒表达系统的质粒图谱，设计引物，以本实验室所保存的pMD18-T-HN及pMD18-T-F阳性质粒为模板扩增出HN及F基因，分别命名为pMD18-T-GPMV-HN及pMD18-T-GPMV-F。将其克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A的XhoⅠ和EcoRⅠ之间的多克隆位点上，分别命名为pBlue-GPMV-HN及pBlue-GPMV-F。纯化该重组质粒并与杆状病毒共转染Sf9昆虫细胞，4d后获得重组病毒，名为P1。将经过3轮蚀斑筛选纯化，PCR鉴定获得重组病毒，分别命名为rBv-HN及rBv-F。将重组病毒反复扩毒3次，获得高浓度的重组病毒名为P3，接种Sf9单层细胞上，4d后收获病变细胞，经SDS-PAGE电泳鉴定，表达F蛋白分子量约为60ku，表达HN蛋白分子量约为66ku，与理论值相符。表达产物HN蛋白的Western blot和Dot-ELISA结果表明其可与鸡抗GPMV血清发生特异性抗原反应，证实所表达的HN蛋白有较好的反应原性。本研究将株的HN及F基因利用昆虫杆状病毒表达系统中表达，并获得了HN主要抗原位点基因的表达，对GPMV的基础性研究、预防控制和病毒诊断试剂研制奠定重要的物质基础。