EGF对牛前脂肪细胞增殖和分化的影响

论文摘要

表皮生长因子（Epidemal growth factor,EGF）是一类重要的生长因子,通过与细胞膜上的受体结合而发挥作用。它主要通过与其受体结合而使结合区域结合发生构型变化,从而改变细胞的骨架结构,使细胞分化、分裂和增殖。多项研究均表明EGF可以促进前体脂肪细胞的增殖。但是EGF对前体脂肪细胞分化的影响,各家众说纷纭。并且还未见EGF对于牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。我国对于脂肪细胞的研究刚刚起步,大部分是关于不同种属的脂肪细胞形态学的研究。对于牛前体脂肪细胞体外培养模式及其培养过程中影响因素都少见报道。本文对于表皮生长因子的结构、生理功能、脂肪细胞来源、脂肪细胞分化的体外系统、脂肪细胞分化增殖的过程及影响因素作一综述。本实验通过建立牛前体脂肪细胞原代培养,采用细胞生物学基本方法,观察了牛前脂肪细胞增殖分化过程中的形态变化,以及采用RT-PCR方法检测了不同培养基培养过程中脂肪细胞分化标志基因的表达量的变化。通过添加不同浓度（10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL）的EGF到前脂肪细胞培养基中,用MTT比色法、油红O提取比色法和RT-PCR法检测了不同浓度的EGF对脂肪细胞增殖及分化的影响。获得的研究主要结果如下:1.建立了本实验室成熟的牛前脂肪细胞培养体系。用I型胶原酶,将剪碎的脂肪组织块在37℃水浴恒温振荡器中消化50 min（ 120次/ min）,即可得到脂肪细胞。组织块法与胶原酶消化法相比也可得到脂肪细胞,且剪的越碎,培养的成功率越高,操作简便;但细胞生长缓慢、细胞数量少。胶原酶法可得到大量的前体脂肪细胞。并且在培养过程中,用分化培养基培养与完全培养基培养通过油红O提取比色法及分化标志基因表达量的变化的比较,证明分化培养基可促进脂肪细胞分化。2、通过MTT比色法检测发现,10 ng/mL～200 ng/mL浓度的EGF均可促进牛前脂肪细胞的增殖,且10 ng/mL的EGF与各组相比均能显著促进牛脂肪细胞的增殖。3、牛前脂肪细胞在分化诱导培养两天后,无血清培养基中添加10 ng/mL～200 ng/mL不同浓度的EGF处理均可促进脂肪细胞分化,测定脂肪细胞分化标志基因LPL、PPARγ和A-FABP mRNA的相对表达量发现各浓度均能能促进脂肪细胞分化。并且200 ng/mL与各处理组相比均可在第8 d显著促进脂肪细胞分化。

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摘要

ABSTRACT

文献综述

第一章表皮生长因子的研究进展

1.1 EGF 家族分子特性

1.2 EGF 受体

1.3 EGF 介导的信号通路的研究现状

1.4 EGF 的生物学效应

1.5 EGF 对前脂肪细胞增殖和分化的影响

第二章脂肪细胞研究概况

2.1 脂肪细胞的来源、分布、结构与功能

2.1.1 脂肪细胞的来源

2.1.2 脂肪细胞的分布

2.1.3 脂肪细胞的结构

2.1.4 脂肪细胞的功能

2.2 前体脂肪细胞增殖与分化的研究进展

2.2.1 前体脂肪细胞的原代培养

2.2.2 前体脂肪细胞系培养

2.2.3 前体脂肪细胞分化研究概况

2.2.4 脂肪细胞分化过程中的形态变化

2.2.5 脂肪细胞分化过程中基因的表达

2.2.6 促进脂肪细胞分化的转录因子和相关蛋白

2.2.7 前体脂肪细胞增殖与分化的影响因素

2.2.8 生长因子对脂肪细胞增殖与分化的影响

实验研究

前言

第三章牛前脂肪细胞分离培养模型的建立

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 消化法分离培养前脂肪细胞

3.1.3 组织法培养前脂肪细胞

3.1.4 MTT 比色法检测

3.1.5 细胞生长曲线测定

3.1.6 油红O 染色及细胞脂肪含量检测

3.1.7 RT-PCR 检测脂肪细胞分化标志基因的表达

3.1.8 电泳及凝胶成像和定量分析

3.1.9 统计分析

3.2 结果

3.2.1 牛前体脂肪细胞的原代培养的形态学观察

3.2.2 组织块法培养前脂肪细胞

3.2.3 MTT 比色法检测细胞活率

3.2.4 牛前体脂肪细胞生长曲线的绘制

3.2.5 油红O 染色及细胞脂肪含量检测

3.2.6 脂肪细胞分化标志基因在牛前体脂肪细胞分化过程中的表达

3.3 讨论

第四章 EGF 对牛前脂肪细胞增殖和分化的影响

4.1 不同浓度的EGF 对牛前脂肪细胞增殖的影响

4.1.1 实验方法

4.1.2 结果与分析

4.1.3 讨论

4.2 不同浓度的EGF 对前脂肪细胞分化的影响

4.2.1 实验方法

4.2.2 结果

4.2.3 讨论

结论

参考文献

缩略词表

致谢

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