人HCC侵袭、复发相关分子的蛋白质组学研究及S100A9蛋白的表达验证

论文摘要

目的：应用比较蛋白质组学策略，对有侵袭、复发的人HCC组织标本的蛋白质表达谱中差异蛋白质点进行比较分析，筛查与HCC侵袭、复发相关的蛋白质分子，初步探讨其临床应用价值。 材料和方法：选择经临床和病理证实有侵袭和复发的人HCC组织标本（以无侵袭、复发的HCC为相应对照）各5例，提取肝癌组织总蛋白，应用IPG胶条（pH3～10NL，13cm）的和12.5％的SDS-PAGE进行双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE）分离蛋白，用Image Master扫描及分析软件对相应比较组的全蛋白质表达谱进行差异点分析，胶内酶解差异点所得的肽段应用基质辅助的激光解吸离子化—飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption／ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）分析，数据送入NCBI非冗余数据库，通过MASCOT搜索引擎检索、鉴定出相应蛋白质。并应用免疫组织化学、Western blot分析、RT-PCR等技术对分别筛选出的S100A9蛋白在组织学水平、蛋白质水平和mRNA水平进行了表达验证。扩展免疫组化检测S100A9在正常肝组织、乙肝后肝硬化组织和不同表型肝癌组织标本中的表达，联系临床病理资料，初步探讨其临床应用价值。 结果：在相同条件下，侵袭组（Ⅰ组）平均检测到1079±56（n=3）个蛋白点，非侵袭组（NI组）为1058±73（n=3）个。以其中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶，进行2组间的匹配分析，筛选出差异2倍及以上且出现频率大于等于50％的蛋白点31个。其中1235号点在NI、Ⅰ组织中的表达存在显著差异，胶内校正后的灰度平均值比较Ⅰ是NI的13.3倍。结果鉴定出S100A9、S100A8、HSP27、Prx2、Annexin Ⅳ等22

论文目录

• 缩略语中英文对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 人HCC侵袭、复发相关分子的蛋白质组学研究
• 材料和方法
• 结果
• 1.侵袭相关
• 2.复发相关
• 讨论
• 1.侵袭相关
• 2.复发相关
• 参考文献
• 第二部分 人HCC侵袭相关蛋白S100A9的表达验证及初步应用研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 文献综述 蛋白质组学技术及其研究进展
• 致谢
• 论文发表及获奖情况