论文摘要
OBF-1（Oct binding factor-1）又称OCA-B或Bob-1,是B细胞特异性转录共激活因子。已发现OBF-1能调节B细胞发育和功能,在OBF-1缺陷小鼠中,B细胞成熟的多个阶段受到影响,完全破坏生发中心的形成,导致体液免疫缺陷。MRL/MpJ-Faslpr/lpr （MRL-lpr）小鼠以产生自身抗体和免疫复合物介导的肾小球肾炎为特征,是研究系统性红斑狼疮的主要模型之一。本研究构建了OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠和OBF-1野生MRL-lpr小鼠,并在这两种模型小鼠的基础上,研究OBF-1缺陷对抗体分泌细胞产生及自身免疫发展的影响。1 OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠及OBF-1野生MRL-lpr小鼠模型的建立将MRL-lpr小鼠与OBF-1缺陷小鼠进行杂交,产生子一代小鼠（F1）,再将F1小鼠雌雄配对产生子二代小鼠（F2）,用PCR对F2小鼠进行基因型鉴定（OBF-1和Fas基因）,从中挑选出OBF-1-/-Fas-/-小鼠,再与亲代小鼠MRL-lpr回交。经如此杂交-回交68代,获得OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠(OBF-1-/-Fas-/-)及OBF-1野生MRL-lpr小鼠(OBF-1+/+Fas-/-)。2 OBF-1缺陷对MRL-lpr小鼠抗体分泌细胞产生和自身免疫发展的影响2.1 OBF-1缺陷对MRL-lpr小鼠自身免疫发展的影响选用3-4月龄基因型为OBF-1+/+Fas-/-和OBF-1-/-Fas-/-小鼠各6只,利用夹心ELISA法检测每只小鼠血清中所有免疫球蛋白、抗双链DNA抗体（ds-DNA抗体）和抗核抗体（ANA）,结果表明OBF-1+/+Fas-/-小鼠血清中的所有的免疫球蛋白显著增高,尤其是IgG亚类（IgG1、Ig2a、IgG3、IgG2b）,其中IgG2a含量最低有5000μg/mL,而OBF-1-/-Fas-/-小鼠血清IgG各亚类含量均降低,其中IgG2a含量最高仅为200μg/mL。OBF-1+/+Fas-/-小鼠血清中能检测出自身抗体（抗ds-DNA抗体及抗核抗体）,而在OBF-1-/-Fas-/-小鼠不能检测到,以上结果显示表明MRL-lpr小鼠OBF-1缺陷可使所有免疫球蛋白水平显著降低,消除自身抗体。免疫荧光染色发现OBF-1+/+Fas-/-小鼠肾小球有IgG和补体C3沉积,而OBF-1-/-Fas-/-小鼠肾脏没有沉积;PAS法染色发现OBF-1+/+Fas-/-小鼠肾小囊腔增大,并形成新月体,而OBF-1-/-Fas-/-小鼠肾脏没有上述现象。结果说明OBF-1缺陷能抑制MRL-lpr小鼠免疫复合物介导的血管球性肾炎的发生。2.2 OBF-1缺陷对MRL-lpr小鼠自身抗体产生缺陷的机制通过ELISPOT检测OBF-1缺陷对MRL-lpr小鼠抗体分泌细胞的影响,OBF-1+/+Fas-/-小鼠脾脏检测到大量IgG抗体分泌细胞（约820个斑点/105脾细胞）,而OBF-1-/-Fas-/-小鼠脾脏只检测到少量IgG抗体分泌细胞（约5个斑点/105脾细胞）,骨髓中检测结果与脾脏类似,结果显示OBF-1对MRL-lpr小鼠抗体分泌细胞的产生是必需的。通过半定量RT-PCR法检测对浆细胞特异性基因Blimp-1,Xbp-1,Irf-4,Bcl-6和J链的表达,结果表明OBF-1+/+Fas-/-小鼠相比,OBF-1-/-Fas-/-小鼠Irf-4、xbp-1、Blimp-1、Bcl-6 mRNA水平没有明显差别,而J链mRNA显著降低。为明确J链转录是否依赖OBF-1,进而检测对照小鼠OBF-1+/+小鼠和OBF-1-/-小鼠脾脏B细胞J链的mRNA表达,两者mRNA水平无显著差别,提示OBF-1-/-MRL-lpr小鼠J链的转录抑制可能与lpr和OBF-1的相互作用有关。以上结果表明OBF-1不能在mRNA水平上影响MRL-lpr小鼠抗体分泌细胞的形成。进而利用流式细胞技术检测分析B细胞发育,结果发现,与OBF-1+/+Fas-/-小鼠相比,OBF-1-/-MRL-lpr小鼠脾脏和骨髓中的未成熟B细胞（CD19+IgM+）和成熟B细胞（CD19+IgD+）数量没有减少,说明MRL-lpr小鼠OBF-1缺失不影响B细胞的发育。OBF-1-/-MRL-lpr小鼠脾脏和淋巴结中CD3+、CD4+、CD8+T细胞发育未受影响,但CD3+B220+这群T细胞数量却显著降低。结果显示OBF-1-/-Fas-/-小鼠抗体分泌可能与这群T细胞有关,而可能与B细胞无关。综上所述,MRL-lpr小鼠OBF-1缺陷可消除自身抗体,抑制狼疮样肾小球炎症,表明OBF-1对自身抗体分泌细胞产生及自身免疫发展具有重要作用,可作为研发治疗红斑狼疮药物有效靶点。
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相关论文文献
- [1].三氧化二砷对MRL-lpr狼疮肾炎小鼠淋巴细胞凋亡及相关基因的影响[J]. 中国血液净化 2009(04)
- [2].三氧化二砷对MRL-lpr小鼠自身免疫反应及与凋亡相关的Caspase家族的影响[J]. 中国中西医结合肾病杂志 2009(10)