煤矽尘接触者TGF-β1表达水平及其早期健康损害研究

论文摘要

尘肺病是目前我国职业病中发病率最高、死亡危险性较大、对工人健康危害最严重的一类,据统计,目前我国尘肺病例约占职业病患者总人数的近2/3。尘肺的发病机制十分复杂,目前对其发生发展具体分子机制尚未完全阐明,也缺乏对其根治或阻止其进展的方法,控制的关键在于预防。筛选尘肺易感性生物标志物、及早检出粉尘接触者健康损害效应并采取相应措施等是重要的防治手段之一。尘肺是以肺组织纤维化为主的全身性疾病。目前国内外研究者认为多种细胞因子在肺纤维化形成过程中发挥着重要作用,其中转化生长因子β1（Transforminggrowth factor-betal,TGF-β1）的作用尤其受到关注。TGF-β1可能通过上调胶原和纤维粘连蛋白基因表达促进细胞外基质的增多,并可能通过降低蛋白酶分泌和增加蛋白酶抑制剂的分泌抑制基质的降解,从而参与肺组织的纤维化过程。尘肺个体易感因素,特别是遗传因素研究在国际范围内已经受到重视。目前已有报道称TGF-β1基因多态性与TGF-β1蛋白的分泌量及罹患某些疾病的危险度相关。研究资料提示TGF-β1基因编码区第一外显子+869、+915位点存在单核苷酸多态性,分别是T＞C、G＞C,这种基因多态性是否确实影响TGF-β1的表达、分泌,进而对粉尘接触者罹患尘肺病的易感性产生影响,有必要加以探讨。尘肺发病后逐渐进展至肺通气、换气功能出现障碍,继而还会造成心脏受损而引起肺心病等并发症。由于尘肺早期一般无明显的症状、体征,所以依据近年来对尘肺发病机制的研究结果,适当选择指标,进一步细致观察接尘工人早期娇邓鸷Φ谋浠?对于深入探索尘肺早期预警、改进接尘工人的健康监护等防治措施具有十分重要的意义。本研究以河南省汉族男性煤矽尘接触者194例为调查对象（其中0+接尘者90例、无尘肺接触者104例）,分别进行一般健康状况检查,采集外周静脉血、提取全血DNA,采用ELISA试剂盒检测血清TGF-β1的浓度,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术对其TGF-β1+869、+915位点多态性进行检测,并对调查对象进行血脂水平、肺功能和心电图检查。目的是初步探讨煤矽尘接触者TGF-β1表达水平变化及其意义,观察煤矽肺的易感性是否受到TGF-β1基因+869、+915位点多态性的影响,进一步阐明煤矽肺早期血脂代谢、肺功能等是否发生改变。材料与方法1.调查对象选择河南省某煤矿男性汉族、目前从事煤矽尘作业的掘进工194例,经河南省某职防所按现行的《尘肺X线诊断标准》（GBZ70-2002）进行诊断确诊为0+90例;其余104例为无尘肺接尘组。调查对象均无甲状腺功能减退、糖尿病、胰腺炎、肾病综合征、胆汁淤滞性肝胆病、免疫系统疾病和其他肺部疾病,自愿合作。所接触的煤矽混合尘中游离二氧化硅含量为5.8%。短时间接触浓度范围为6～161mg/m3,几何平均值为22.96mg/m3;时间加权平均浓度范围为12～65.38mg/m3,几何平均值为27.12mg/m3。粉尘分散度小于2μm的尘粒占79%～89%。2.调查方法2.1问卷调查所有调查对象均接受问卷调查,内容包括个人一般状况、煤矽尘作业史、既往病史和家族史等。2.2血样采集和DNA提取全部研究对象取清晨空腹静脉血5ml,3ml离心分离血清,—20℃保存备用:2ml用于提取全血DNA,—20℃保存备用。2.3血清TGF-β1浓度检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测TGF-β1浓度,严格按照试剂盒说明书进行操作。2.4 TGF-β1基因多态性检测通过DNA聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增包含TGF-β1编码区第一外显子+869、+915位点的DNA片段,限制性片段长度多态性（restrictionfragment length polymorphism,RFLP）分析技术鉴定基因型。2.5血脂检测采用终点法测定血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三脂（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）的血清含量。2.6肺功能和心电图检查采用肺功能仪测定所有调查对象的用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、一秒钟用力呼气容积(forced vital capacity in one second,FEV1.0)。采用心电图仪测定所有调查对象的心电图（ECG）。2.7统计学分析用EXCEL2003对全部调查和测定结果建立数据库,用SPSS12.0软件对数据进行统计分析。检验水准α=0.05。结果1.调查对象一般情况调查对象中0+组90例,年龄23～58（39.89±7.41）岁,接尘工龄3～36（18.35±8.79）年;接尘组104例,年龄21～59（37.49±9.01）岁,接尘工龄2～39（15.52±9.82）年。2.血清TGF-β1浓度检测结果接尘组TGF-β1平均浓度为（39.71±13.31）pg/L,0+组TGF-β1平均浓度为（49.44±14.43）pg/L,0+组TGF-β1平均浓度高于接尘组,差异有统计学意义（P＜0.05）。0+组中和接尘组中不同基因型之间TGF-β1浓度比较结果显示:TGF-β1+869位点T/T基因型、T/C基因型、C/C基因型之间的平均浓度差异均无统计学意义（P＞0.05）。0+组和接尘组中不同年龄、不同工龄、吸烟与不吸烟TGF-β1浓度比较结果显示:两组中不同年龄、不同工龄、吸烟与不吸烟者之间的TGF-β1平均浓度差异均无统计学意义（P＞0.05）。3.0+组和接尘组+869、+915位点基因型分布比较TGF-β1+869位点存在单核苷酸多态性,存在3种基因型,分别为T/T、T/C、C/C基因型,TGF-β1+869位点基因型及等位基因频率在0+组和接尘组中的分布差异均无统计学意义（P＞0.05）;TGF-β1+915位点在本次研究中不存在单核苷酸多态性,在所研究的群体中只观察到一种基因型,即为G/G基因型。4.血脂分析结果0+组血清含量平均值分别为TC（148.759±35.136mg/dl）、TG（128.281±70.391mg/dl）、HDL-C（47.225±12.076mg/dl）、LDL-C（70.592±35.715mg/dl）;接尘组血清含量平均值分别为TC（130.896±30.085mg/dl）、TG（111.084±75.938mg/dl）、HDL-C（51.632±11.936mg/dl）、LDL-C（59.281±35.244mg/dl）。其0+组TC、LDL-C含量高于接尘组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;0+组HDL-C低于接尘组,差异有统计学意义（P＜0.05）;TG水平两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。0+组各项指标的异常检出率分别为TC 13.33%、TG 35.56%、HDL-C 34.44%、LDL-C 16.67%;接尘组各项指标的异常检出率分别为TC 7.69%、TG 18.27%、HDL-C 39.42%、LDL-C 5.77%。0+组TG、LDL-C异常检出率均高于接尘组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;TC和HDL-C异常检出率两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。5.肺功能、心电图分析结果0+组用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、第一秒用力呼气量(forced vitalcapacity in one second,FEV1.0)、一秒率(FEV1.0/FVC%)平均值分别为2.837±0.883L、2.491±0.617L、88.58±10.82%;接尘组FVC、FEV1.0、FEV1.0/FVC平均值分别为3.150±0.865L、2.729±0.593L、90.35±11.40%。0+组FVC、FEV1.0均低于接尘组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;FEV1.0/FVC两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。0+组肺功能各项指标的异常检出率分别为FVC 66.67%、FEV1.083.33%、FEV1.0/FVC 31.11%;接尘组肺功能各项指标的异常检出率分别为FVC 49.04%、FEV1.078.85%、FEV1.0/FVC 23.08%。0+组FVC异常检出率高于接尘组,差异有统计学意义（P＜0.05）;FEV1.0、FEV1.0/FVC两组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。心电图结果显示:0+组有3例心电图异常,接尘组有4例心电图异常。结论1.转化生长因子β1可能参与了煤矽肺早期病变的发生发展。2.TGF-β1+869位点存在的单核苷酸多态性与早期煤矽肺不存在相关性,不同基因型对血清TGF-β1浓度没有影响;TGF-β1+915位点在本次调查人群中不存在多态性。3.煤矽肺早期血脂水平发生了改变,可能更易发生心血管疾病。4.煤矽肺早期肺功能降低,煤矽肺早期病变对心脏功能没有影响。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 论文部分
• 引言
• 调查对象与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 细胞因子与肺纤维化的关系
• 参考文献
• 英文缩略词
• 后记