加压毛细管电色谱法用于银杏叶的质量控制及其药物动力学研究

论文摘要

银杏叶为近年来国内外中药（植物药）研究开发的热点之一。其所含化学成分非常复杂,包括黄酮类、萜类、生物碱、多糖类、酚类、氨基酸、微量元素等。银杏叶中黄酮类化合物含量较高,其中以槲皮素、异鼠李素和山萘酚的糖苷为主。许多实验已证实,银杏叶中黄酮类物质具有非常广泛的生理和药理活性,如扩张冠状血管、抗炎症、抗氧化、抗病毒、调节免疫功能等。本文首次采用加压毛细管电色谱法（pressurized capillary electrochromatography, pCEC）对银杏叶中黄酮类化合物进行分离,并以主要活性成分槲皮素和山萘酚为主要指标,研究其在大鼠体内的药物动力学。首次建立了银杏叶药材的加压毛细管电色谱指纹图谱,应用了相似度分析和主成分分析对不同产地银杏叶药材的质量进行了评价。本论文共分四章,主要内容包括:第一章介绍了选题背景和意义。主要介绍了银杏叶的化学成分和药理活性,综述了加压毛细管电色谱法的原理和研究进展,阐述了中药指纹图谱的重要意义。第二章的工作,主要是建立了加压毛细管电色谱法对银杏叶中黄酮类化合物进行分离的条件。通过对检测波长、流动相、离子强度、电压各主要因素的考察,最终建立的电色谱条件为:流动相:甲醇-磷酸溶液（10 mM）（55:45,v/v）等度洗脱;检测波长:360 nm;检测电压为10 kV。并同时比较了在此相同条件下pCEC、毛细管液相色谱（cLC）、高效液相色谱（HPLC）的分离效果,发现pCEC能在最短的时间内达到最高的柱效,说明pCEC与cLC、HPLC相比,具有分析速度快,分离效率高的优势,是一个很好的微分离手段。第三章的工作,以银杏叶中的指标性有效成分槲皮素和山萘酚为研究对象,采用加压毛细管电色谱法（pCEC）研究其在大鼠体内的药物动力学。以SD雄性大鼠为实验动物,灌胃给药后,用甲醇-磷酸溶液（10 mM）（55:45,v/v）等度洗脱,在电压为6 kV下测定大鼠血浆中槲皮素和山萘酚的含量,并绘制药-时曲线。结果显示槲皮素和山萘酚的达峰时间均为2 h,且山萘酚吸收不规则,出现多峰现象。第四章以10批不同产地的银杏叶药材为研究对象,采用填充5μm粒径C18填料的毛细管色谱柱,通过对药材提取、流动相、电压各主要影响因素的考察,优化了加压毛细管电色谱银杏叶指纹图谱的条件,首次建立了银杏叶的加压毛细管电色谱指纹图谱。采用了国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件对不同产地的银杏叶进行了相似度的评价,评价的结果显示除7号样品的相似度为0.676外其他九批药材的相似度均在0.900以上,相似度高,说明这九批药材的质量是相对稳定的。另外还应用了主成分分析对不同产地银杏叶进行了分类,结果与相似度评价结果都是较为一致的,为银杏叶药材的质量分析和控制提供了可靠的依据。本文通过应用现代微分离色谱技术加压毛细管电色谱对银杏叶药材进行了中药现代化研究,并研究了其指标成分的药物动力学,首次建立了银杏叶的加压毛细管电色谱指纹图谱,并且对其质量进行了评估,发展了微量电色谱技术对银杏叶进行分离和鉴定研究,为中药分离和质量控制提供了新思路和新方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 银杏叶概述
• 1.1.1 银杏叶的主要化学成分
• 1.1.2 银杏叶的主要药理活性
• 1.2 加压毛细管电色谱技术
• 1.2.1 毛细管电色谱概述
• 1.2.2 毛细管电色谱在实用中的问题
• 1.2.3 加压毛细管电色谱及其应用
• 1.3 中药指纹图谱研究进展
• 1.3.1 中药指纹图谱的分类
• 1.3.2 解析指纹图谱的方法
• 1.3.3 银杏叶指纹图谱的研究进展
• 1.3.4 中药指纹图谱存在的问题
• 1.3.5 本论文研究的意义及内容
• 2 加压毛细管电色谱法用于银杏叶中黄酮类化合物的分离
• 2.1 研究背景
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 实验仪器与试剂
• 2.2.2 标准溶液的配制
• 2.2.3 加压毛细管电色谱的分离条件
• 2.2.4 高效液相色谱的分离条件
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 检测波长的选择
• 2.3.2 流动相的选择
• 2.3.3 离子强度的影响
• 2.3.4 运行电压的影响
• 2.3.5 优化后的分离条件
• 2.3.6 加压毛细管电色谱的方法评价
• 2.3.7 加压毛细管电色谱（pCEC）、毛细管液相色谱（cLC）、高效液相色谱（HPLC）分离效能的比较
• 2.4 小结
• 3 加压毛细管电色谱用于银杏叶制剂的药物动力学研究
• 3.1 研究背景
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验仪器
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 实验动物
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 对照品的制备
• 3.3.2 动物处置与血浆样品的收集
• 3.3.3 加压毛细管电色谱条件的确定
• 3.3.4 血浆预处理条件的确定
• 3.3.5 电压的选择
• 3.3.6 测定方法的专属性
• 3.4 槲皮素测定方法学考察
• 3.4.1 槲皮素的标准曲线
• 3.4.2 槲皮素测定方法的精密度
• 3.4.3 槲皮素的空白回收率
• 3.5 山萘酚测定方法学考察
• 3.5.1 山萘酚的标准曲线
• 3.5.2 山萘酚测定方法的精密度
• 3.5.3 山萘酚的空白回收率
• 3.6 实验结果与讨论
• 3.6.1 血浆浓度
• 3.6.2 C-T 曲线
• 3.6.3 加压毛细管电色谱用于药物动力学研究的优势
• 3.7 小结
• 4 加压毛细管电色谱用于银杏叶药材指纹图谱的研究
• 4.1 研究背景
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 加压毛细管电色谱条件
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 参照物和波长的确定
• 4.3.2 提取方法的选择
• 4.3.3 流动相的组成
• 4.3.4 流动相中酸改性剂的选择
• 4.3.5 操作电压的影响
• 4.3.6 方法学的考察
• 4.3.7 指纹图谱的建立
• 4.3.8 指纹图谱相似度评价
• 4.3.9 主成分分析
• 4.3.10 分析方法的比较
• 4.4 小结
• 总结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文