论文摘要
目的:1、研究转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对原代培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）生物学活性的影响;2、研究TGF-β1对大鼠实验性牙周炎模型的牙周组织中IL-6、BGP表达的影响。方法:1、利用组织培养技术,从健康的牙周组织中获取牙周膜细胞,采用MTT法观察细胞增殖情况,考马斯亮蓝法和流式细胞仪技术检测细胞蛋白总含量和细胞周期变化,酶动力学法和RT-PCR检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和ALPmRNA表达的变化。2、在成功建立大鼠实验性牙周炎模型的基础上,实验动物注射TGF-β1后分别于第1、2、3、4周处死（每次每组10只）,取牙周组织标本做切片,行常规HE染色,观察牙周组织病理变化状况,并采用免疫组织化学法检测IL-6、BGP水平的变化。结果:1、牙周膜细胞生长情况原代培养细胞从组织块中游出时间为3～14天,镜下细胞呈长梭形或星形,胞突细长,放射状排列,胞体丰满,胞浆均匀,核圆形或卵圆形者为成纤维细胞。2、TGF-β1对牙周膜细胞生长增殖的影响2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的TGF-β1明显促进细胞增殖（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性,且10.0μg/L的TGF-β1作用细胞72h时促进细胞增殖作用效果最显著,0.5μg/L的TGF-β1与对照组相比差异无统计学意义。3、TGF-β1对牙周膜细胞蛋白总含量的影响2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L组的TGF-β1作用48h时细胞蛋白总含量均高于对照组（P＜0.05）,且10.0μg/L的TGF-β1作用下细胞蛋白总含量增高最显著,0.5μg/L的TGF-β1与对照组相比差异无统计学意义。4、TGF-β1对牙周膜细胞ALP活性变化的影响2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的TGF-β1处理48h,酶动力学检测结果显示细胞ALP活性均高于对照组（P＜0.05）,0.5μg/L的TGF-β1与对照组相比差异无统计学意义。5、TGF-β1对牙周膜细胞ALP mRNA表达的影响RT-PCR检测显示经2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L的TGF-β1作用48h后,ALPmRNA的表达明显增高（P＜0.05）,图像分析光密度,与空白对照组比较,分别增高1.34、1.66、1.75倍。6、TGF-β1对牙周膜细胞周期的影响FCM检测显示经10.0μg/L TGF-β1作用48h后,G1期细胞降低（P＜0.05）,S期细胞和细胞增殖指数PrI值（S+G2/M）%增高（P＜0.05）。7、动物实验中各牙周炎组牙周组织中IL-6表达明显高于正常组（P＜0.05）而BGP呈下降趋势（P＜0.05）;各时间段牙周炎治疗组中IL-6表达明显低于牙周炎组（P＜0.05）,BGP明显高牙周炎组（P＜0.05）,且牙周炎治疗组各时间段之间BGP表达有明显差异（P＜0.05）,而IL-6表达只有部分时间段有明显差异（P＜0.05）。结论:2.0～10.0μg/L的TGF-β1体外具有促进人牙周膜细胞增殖和诱导分化的作用,其作用可能与TGF-β1促进细胞DNA、蛋白质合成和ALPmRNA的表达及ALP酶活性增强有关。大鼠实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6表达明显高于正常组而BGP表达低于正常组,经TGF-β1治疗后,实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6表达明显低于同期的牙周炎组而BGP含量明显增加。根据上述结果证实TGF-β1可促进牙周创伤愈合和组织再生,从而为牙周病临床的合理用药提供科学依据。
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