PCR-RFLP技术快速检测和鉴定血液中念珠菌的实验性研究

论文摘要

目的:建立聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）快速检测和鉴定念珠菌的方法。方法:采用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒（以下简称Biospin）对20份念珠菌感染的血液模拟标本提取DNA,并与经典酶解-酚氯仿抽提法结果进行比较。采用PCR-RFLP技术,即对核糖体DNA内部转录间隔区（ITS）的编码基因进行核酸扩增后用MspI酶切PCR产物产生不同的特异带型,对50份念珠菌感染的血液模拟标本进行检测和鉴定并与常规血培养结果进行比较,同时检测该技术的敏感性、特异性。结果:1真菌通用引物对血液中常见的白色念珠菌、热带念珠菌及克柔念珠菌进行扩增,结果均为阳性,在520bp左右均扩增出一清晰的条带。2应用通用引物对白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌感染模拟血标本作PCR,证实检测的敏感度均为10CFU/ml。3 PCR产物经MspI酶酶切后进行8%聚丙酰胺凝胶垂直电泳,条带清晰,条带之间分离明显,产生了三种不同的特异性带型,将三种念珠菌区分开来。4 Biospin提取的DNA含量明显高于酶解-酚氯仿抽提法,差异有显著性（t=7.259,p <0.01）。5 PCR-RFLP对模拟标本检测和鉴定结果明显高于常规血培养（p<0.05）,PCR-RFLP法与常规培养法具有较好的一致性（к=0.694, p<0.01）。结论:PCR-RFLP技术是早期快速诊断念珠菌感染的有效手段。与常规血培养相比较,PCR-RFLP更为可靠、稳定,具有较高敏感性、特异性。

论文目录

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