家兔间盘细胞三维培养及臭氧对单层细胞的作用观察

论文摘要

间盘源性疼痛已经成为困扰人体健康的常见疾病，随着认识的进一步深入，传统的手术治疗不再是唯一的选择，新的治疗方法、治疗技术不断涌现，并日臻成熟和广泛推广，应用于间盘源性疼痛的治疗。臭氧髓核消融术是最近风靡欧洲的一种经皮穿刺技术，具有安全、有效、损伤小、恢复快的优点，深受医患双方的欢迎。并且近年来随着组织工程学的蓬勃发展和在骨与关节软骨缺损修复中的成功应用，人们开始尝试用组织工程学的方法重建受损或切除的间盘。目的：1、本实验主要是在单层培养家兔间盘细胞的基础之上建立三维培养模型，作为以后应用椎间盘组织工程学治疗间盘源性疼痛的实验基础。2、并且通过医用臭氧（O3）作用于体外培养家兔间盘细胞，观察不同浓度臭氧在不同时间的作用效应，从而指导临床治疗工作。方法：实验一：首先建立家兔间盘细胞体外单层培养系统，将家兔处死后取出间盘组织，采用组织消化分散法收集细胞后种植在24孔培养板上，在单层培养的家兔间盘细胞传代后，将所有收集的细胞置于一锥形瓶内，37℃下，持续给予160rpm偏心轴旋转，六天后，4℃下4％多聚甲醛固定，琼脂定形后蜡块包埋切片HE染色，光镜下观察。实验二：将单层培养的家兔间盘细胞制成细胞悬液，分成四组，分别给予纯氧、30ug／ml医用臭氧、60ug／ml医用臭氧、80ug／ml医用臭氧，分别于15分钟和30分钟时取细胞作台盼蓝细胞排斥试验。统计分析：采用SPSS12.0统计软件进行分析，组内比较采用两样本t检验，组间单因素方差分析。P＜0.05认为具有统计学意义。结果：实验一：三维培养后发现，肉眼下，家兔间盘细胞呈白色沙粒样团块，即Pellet小体。间盘细胞蜡块包埋HE染色后可见，细胞聚集呈现为细胞团，并且与单层细胞培养中表现的成纤维细胞样梭形形态不同，呈近乎自然形态的类圆形。实验二：15分钟时不同浓度医用臭氧组间都具有统计学意义，并且随着臭氧浓度的增加，活细胞率呈降低趋势。30分钟时统计结果显示，对照组与30ug／ml医用臭氧组没有统计学差别，其他各组之间都存在统计学差别。对照组、30ug／ml医用臭氧组及80ug／ml医用臭氧组在不同时间前后台盼蓝细胞排斥试验结果无统计学意义；只有60ug／ml医用臭氧组在15分钟和30分钟时台盼蓝细胞排斥试验结果有统计学意义。结论：采用传统的离心管内细胞团聚集培养方法得到的细胞小球HE染色后发现，表层细胞呈现梭形，内部细胞比较分散，呈类圆形或者多角形；而本实验方法发现在Pellet小体中细胞多数成类圆形。本实验中可以看出，30ug／ml的医有臭氧可以作用于家兔间盘细胞，但由于浓度过低作用并不完全，可能只起到调节和增加氧供的作用；60ug／ml的医用臭氧随着时间延长作用更加完善；而80ug／ml的医用臭氧在15分钟时已经将间盘细胞氧化完全。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 综述一
• 综述二
• 参考文献
• 致谢