论文摘要
人口老龄化已经成为当今社会关注的重要问题,随之而来的则主要是老年人的健康问题,由于牙体磨耗,牙龈萎缩导致的牙根暴露,口腔环境改变,卫生状况不佳等一系列因素的作用,使得老年人根面龋的发生率大大增加。虽然抗生素、氟化物等药物在防龋方面取得了一定的效果,但其毒副作用却也不可忽视,因此开发新的防龋药物一直是国内外学者的研究重点。茶多酚为茶叶中的抑菌活性成分,约占茶叶干重的25%,是一种高效低毒的自由基清除剂和抗氧化剂,不仅可以提高人体免疫力,延缓衰老,降低血压血脂,而且对变形链球菌的生长有很强的抑制作用。厚朴酚为厚朴的主要抑菌活性成分,不仅对心脑血管有保护作用而且有明显的抗真菌和抑制口腔致病菌的作用。这两种中药是近年来研究较多的天然抗菌药物,但其是否能有效的抑制根面龋的发生发展,以及它们与其他种类药物疗效的对比研究在国内外研究还报道较少。目的:本文通过对比茶多酚、厚朴酚对早期人工根面龋的抑制作用,探讨其防龋机制,为天然抗菌药物在临床的应用与选择提供实验基础和依据。方法:1预备离体牙收集60岁以上因牙周病松动III°拔除的新鲜上颌磨牙40颗（体式显微镜下放大10倍观察,根面无龋坏,无裂痕）,刮除牙周膜和牙石,去离子水超声荡洗5min后于釉牙骨质界处去除牙冠与牙髓组织,在腭侧根面形成4×4×2mm3的牙骨质块,除根面（实验区）外其余部分涂布双层耐酸指甲油保护,将制备好的牙骨质块浸于10%的甲醛溶液中消毒备用。2菌液的制备将复苏48h的变形链球菌（国际标准菌株）于脑心浸液培养基（BHI）厌氧条件下【f（N2）=85%,φ（CO2）=10%,φ（H2）=5%】培养,传代三次后涂片,生化鉴定确定为变形链球菌后使用紫外分光光度计,用无菌生理盐水将菌液调整为OD=1.0的悬浊液备用。3建立人工根面龋模型将消毒好的牙骨质标本置于人工唾液中37℃,24h,使之形成获得性膜后再放于制备好的新鲜菌液中,每48h更换菌液20d后随机抽取牙体组织标本观察确定是否形成早期龋损。4药物处理早期人工龋将形成早期龋损的牙体组织标本随机分到四组:2mg/ml茶多酚溶液组,6.3μg/ml厚朴酚溶液组,20mg/ml氟化钠溶液组和去离子水组,每组8颗标本。将牙体组织标本分别置于上述四种药液中处理,每天浸泡3次每次时间为5min,循环5d,其余时间均置于37℃人工唾液恒温箱中。5钙离子溶出量测定:将四组药物分别处理后的牙骨质标本再次放入新鲜菌液中48h,于4h,8h,12h,24h,48h五个时间点分别取两毫升菌液用紫外分光光度计计算溶液中的钙离子浓度。6扫描电子显微镜观察将菌液中取出的牙骨质块经0.1%PBS缓冲液漂洗三次后立即放入2.5%的戊二醛内固定24h,1%锇酸固定2h,再次放入0.1%PBS缓冲液漂洗三次,50%至无水乙醇逐级脱水干燥后镀金膜,用扫描电镜观察开窗区的牙体组织表面结构并拍照。7统计处理将不同菌液中的钙离子溶出量使用SPSS13.0软件进行方差分析,组间比较用snk-q检验,显著性标准a=0.05。结果:1钙离子溶出量测定结果1.1四组菌液中的钙离子溶出量均在脱矿8小时后均随着时间的延长而增多。1.2在五个不同的时间点:0-8h:各组钙离子溶出量无明显差异,8-48:茶多酚组,氟化钠组,厚朴酚组三组菌液中的钙离子溶出量均较去离子水组显著减少（P﹤0.05）,两两比较后得出茶多酚组和氟化钠组抑龋效果无明显差别（p﹥0.05）,厚朴酚抑龋效果较差（p﹤0.05）。2扫描电镜观察空白对照组:可见牙体表面粘附大量的细菌,牙体组织脱矿后形成大小不等的孔隙,陷窝;陷窝内可见聚集的细菌团块。氟化钠组:牙体组织表面细菌较对照组明显减少,仍可看见牙骨质表面板层结构,有些牙体组织破坏形成的陷窝表面可以看见矿物质的再沉积。茶多酚组:牙体组织结构比较完整,裂隙周围可见散在的细菌。厚朴酚组:牙体表面细菌较对照组减少,牙体组织结构破坏比较明显,牙体表面结构紊乱,牙骨质小管结构呈斑块孔隙和裂隙。结论:1牙体组织随着放入菌液后时间的延长,钙离子溶出量增多。2茶多酚,厚朴酚均可以在一定程度上抑制早期根面龋的发展,但是茶多酚抑制根面龋的作用效果较好。3药物处理后的牙体组织表面结构与对照组存在差异。