论文摘要
【目的】多囊卵巢综合征发病机制不明，高雄激素和胰岛素抵抗是PCOS的主要特征。本文旨在通过研究雄激素对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗形成的作用及剂量和时间效应，并探讨其对胰岛素信号转导分子靶点的作用。第一部分丙酸睾酮对SD雌性大鼠多囊卵巢和胰岛素抵抗形成的影响【方法】将21日龄SD雌性大鼠120只随机分为5组（n=24），实验组（A～C）分别皮下注射丙酸睾酮（0.5mg/100gBW d、0.75mg/100gBW d、1.0mg/100gBW d），对照组（VC和NSC组）分别注射等体积中性茶油和生理盐水，并监测体重和头尾长、腹围的变化。分别于处理的第3周和第8周起连续阴道细胞涂片10天，了解排卵情况；处理第3周和第9周行OGTT试验，眼球后采血检测血糖和血胰岛素；处理3、5、7周后采血并每组处死6只大鼠，检测血总胆固醇、总甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、游离脂肪酸、空腹血糖和空腹胰岛素（TCHO、TG、HDL、LDL、FFA和FPG、FINS）了解雄激素对糖脂代谢的影响；取卵巢组织行病理切片HE染色观察形态学的变化；取腹内脂肪组织称重了解大鼠腹内脂肪聚集情况。【结果】（1）丙酸睾酮处理3周即出现卵巢形态和功能异常，表现为动情周期紊乱及卵巢多囊样变，A、B、C实验组黄体/卵巢面积比、黄体/总卵泡数目比、闭锁卵泡/总卵泡数目比、卵巢外膜及卵泡膜细胞层厚度等与对照组比较差异有统计学意义，P＜0.05，但不同剂量组间无明显差异；（2）丙酸睾酮可导致IR形成，并存在剂量和时间的依赖性，C组处理3周（6周龄）发现1/（FPG×INS）较VC组降低，P＜0.01，随时间延长B组1/（FPG×INS）和A组GAUC/IAUC分别较VC组降低，P＜0.05；（3）丙酸睾酮使大鼠青春期（6周龄左右开始）体重增加，8周龄后B、C组腹内脂肪总重量增加，P＜0.05；（4）脂代谢的异常从处理3周后TCHO和LDL升高，随后FFA和TG逐步升高，以C组紊乱最为明显，均P＜0.05。【结论】青春期前给予SD雌鼠雄激素可导致大鼠在青春期早期即发生卵巢多囊改变，排卵功能障碍及IR等各种表现，且IR的形成与丙酸睾酮的剂量和作用时间相关；丙酸睾酮处理后大鼠体重及VAT的增加和脂代谢紊乱可能与高雄激素和IR形成有关；第二部分睾酮对脂肪和骨骼肌细胞胰岛素抵抗形成的分子机制探讨【方法】诱导3T3-L1前脂肪细胞系和C2C12成肌细胞系分别分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞，然后对这两种细胞分别以10-9M睾酮处理4、8、12、24、48小时及不同浓度(10-12～10-5M)的睾酮处理24小时，用western印迹的方法检测两种细胞在以两种方法处理后胰岛素受体底物1（IRS-1）及其PY941IRS-1和葡萄糖转运载体4（GLUT4）蛋白表达的变化，用Elisa的方法检测处理后细胞InsR水平和分泌TNFα的变化。【结果】（1）IRS-1和GLUT4在两种细胞的表达随着10-9M浓度的睾酮处理时间的延长逐渐增加，分别于处理12h和24h达峰值后表达下降（IRS-1在3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中12h峰值分别是0h对照的1.42±0.42和1.53±0.14倍，均P＜0.05；GLUT4在3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中24h峰值分别是0h的3.22±0.10和5.17±1.06倍，均P＜0.05）。（2）以不同剂量浓度(10-12～10-5M)睾酮处理3T3-L1脂肪细胞，InsR和IRS-1、PY941IRS-1的表达随剂量的升高而增加，于10-8M时表达均转为下降（P＜0.01和P＜0.05）；而GLUT4于10-11M表达最强（较空白对照增加2.58±0.02倍，P＜0.05），然后随着睾酮剂量升高表达下降。（3）以不同剂量浓度(10-11～10-5M)睾酮处理C2C12骨骼肌细胞，InsR蛋白水平无明显变化（P＞0.05）；IRS-1的变化趋势与3T3-L1脂肪细胞相似，当睾酮剂量增加到10-9M后表达转为下降(10-9M睾酮处理后的峰值较空白对照增3.16±0.15倍，P＜0.05)；GLUT4的表达随着睾酮剂量增加有上升的趋势(经10-7mol/l睾酮处理后表达量是空白对照的2.99±0.15倍，P＜0.05)，于10-7M后增加趋势不明显。（4）10-7M的睾酮使3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌增加（P＜0.01）。【结论】睾酮对3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞胰岛素信号转导分子的表达调节存在剂量和时间依赖性。
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