（宁夏医科大学第二附属医院骨科宁夏银川750001）
【摘要】目的：研究宁夏地区回族群体Runx2基因单核苷酸多态性和脊柱后纵韧带骨化及与骨化阶段的相关性。方法：回族脊柱后总韧带骨化患者40例根据骨化类型分为单阶段骨化18例(A组)，连续型骨化22例（B组），对照组40例C组，外周血DNA提取，通过PCR扩增和单碱基延伸反应、质谱技术分析Runx2基因单核苷酸三个位点与脊柱后总韧带骨化发病的关系。结果：Runx2基因RS1321075在实验组与对照组之间差异有统计学意义（Ｐ=0.0271），基因位点分布在Runx2的6号染色体中，A、B组间比较含RS1321075SNP．A等位基因(AA和AT)患者的平均骨化阶段数2.7814，不含RS1321075SNP．A等位基因(TT)患者的平均骨化阶段数3.8571，A、B组间比较患者骨化节段数的方差分析P=0.041(P<O.05)，两组患者骨化有统计学差异，含有A等位基因患者的骨化节段数明显少于不含A等位基因的患者，RS1321075SNP的A等位基因与回族脊柱后总韧带骨化阶段有相关性。结论：宁夏回族人群中OPLL患者Runx2基因中ＳＮＰ的变化可能导致OPLL，回族Runx2基因单核苷酸多态性于脊柱后纵韧带骨化具有相关性。
【关键词】后纵韧带骨化；Runx2基因；单核苷酸多态性；回族
【中图分类号】R681.5【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）06-0263-02
后纵韧带骨化(OssificationofthePosteriorLongitudinalLigament，OPLL)是源于脊柱后纵韧带组织的骨化变性、可持续进展，最终导致脊髓压迫，研究显示65岁的亚洲人的OPLL发病率可高达19.9％～34.6％[1]；OPLL发病原因不明、进展隐秘，目前研究认为脊柱后纵韧带骨化是多基因单核苷酸多态性位点变异产生的遗传学疾病。
1.资料和方法
1.1一般资料
选取我院自2000年1月至2015年8月间收治及确诊脊柱后纵韧带骨化宁夏回族病例，获得随访后调取其影像资料确诊为脊柱后纵韧带骨化且无内分泌科及代谢性疾病共40例为实验组，同等条件纳入回族无脊柱后纵韧带回族志愿者40例为对照组（C组），两组年龄在36～69岁之间，平均年龄64岁；每组随机从1至40编号，根据影像资料测出实验组每个编号对应的后纵韧带骨化阶段数并分组，单阶段骨化18例(A组)，连续型骨化22例（B组），用枸橼酸钠抗凝试管取自体前臂静脉血5ml,于-20度冰箱保存。
1.2实验方法
将冻存血样于37度水浴3分钟充分溶解后立即置于实验室，提取外周血中DNA，进行PCR扩增及单碱基延伸，PCR反应体系使用AssayDesignsoftware设计，引物设计见表1，PCR反应条件为92度15分钟，采取45个循环的扩增反应；94度变性20秒，56度退火30秒，72度延伸1分钟，72度延伸3分钟；实验结束后将产物保存到4度恒温箱，使用北极虾碱性磷酸酶对扩增产物进行处理，将其余核苷酸去磷酸化；PCR产物测序上海正天生物科技有限公司测序。
分别对三个位点的基因型分布进行Hardy-Weinberg平衡检验，SPSS11.5统计软件建库并数据分析，等位基因频率采用直接计数法计算其频率比较采用四格表χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
Hardy-Weinberg平衡法检验等位基因频率均符合H-W平衡（P＞0.001），样本具有群体代表性。等位基因的基因分型分析Rs6908650、Rs7771889于后纵韧带骨化及骨化阶段无相关性（P＞0.001）；RS1321075在实验组(A组、B组）与对照组之间差异有统计学意义（Ｐ=0.0271），基因位点分布在Runx2的6号染色体中，RS1321075SNP．A等位基因(AA和AT)患者的平均骨化阶段数为2.7814，不含RS1321075SNP．A等位基因(TT)患者的平均骨化阶段数为3.8571。A、B两组患者骨化节段数的方差分析P=0.041（P<O.05），有统计学差异，含有A等位基因患者的骨化节段数明显少于不含A等位基因的患者，可见RS1321075SNP对回族OPLL患者后纵韧带骨化的进展有调控作用。RS1321075SNP的A等位基因能抑制后纵韧带骨化的发展及延续，而RS1321075SNP的T等位基因则会促进和加重后纵韧带骨化的发展和延续。
3.讨论
本次研究发现Runx2在基因区变异(RS1321075)与回族脊柱后纵韧带骨化过程中起决定性作用；Runx2基因在成骨细胞、破骨细胞的分化和成熟中及血管内皮生长因子(VEGF)的表达、力学信号转化传导为生物学信号的过程起重要调控作用。
本次研究显示Runx2基因单核苷酸位点的多态性与部分回族OPLL的发病有明确的相关性，Runx2基因的RS1321075SNP的多态性可能会影响脊柱后纵韧带骨化患者的骨化节段性，RS1321075SNP的T等位基因能促进后纵韧带骨化的发张和延续，RS1321075SNP的A等位基因能抑制脊柱后纵韧带骨化的进展；说明Runx2基因对部分回族脊柱后纵韧带骨化节段的发展和延续起到重要的作用，可见Runx2基因对部分回族OPLL的发病及进展都有关键的调控作用。
本次研究证实RS1321075等位基因的突变不仅促使了脊柱后纵韧带骨化的发生而且还促进了病情的发展，是首次对Runx2基因在回族群体脊柱后总韧带骨化过程的研究，首次发现Runx2基因对回族群体OPLL发生和发展都有影响的基因。这对于我们从基因学水平研究地区性、种族性疾病提供了科学依据，尤其是在宁夏回族保持着良好的种族群体，对我们认识和了解OPLL这一疾病又有了进一步的推动作用，但是本次研究也存在不足之处是本次研究只选取了Runx2上三个位点，未完全覆盖Runx2上所有SNPs位点，希望在下一步研究中实现全覆盖。
【参考文献】
[1]刘世文,杜继民,张大旭,等.关于后纵韧带骨化的流行病学调查分析[J].白求恩医科大学学报,1995,20(4):411-413.
[2]魏威，张永华，石仕元，等，颈椎后纵韧带骨化症的易感基因研究现状[J].中国优生与遗传杂志，2010，18(4)：11-13．
作者简介：黄永军，男，副主任医师，宁夏医科大学第二附属医院骨科750001
蔡艳，女,宁夏医科大学第二附属医院骨科750001
窦钰璞，女，宁夏银川市妇幼保健医院750001
宁夏回族自治区卫生厅重点科研项目（2013071）