氟化物刺激成纤维细胞成骨表型表达及其在氟骨症骨周化骨发生机制中的作用

论文摘要

骨周软组织钙化和骨化是慢性氟中毒重要的骨病变之一,其发生机制不清。骨周软组织中的主要细胞成分是成纤维细胞,本文将重点研究氟化物对成纤维细胞增殖分化、骨生长因子表达、成骨表型转换以及细胞内Ca2+浓度等方面的影响,探讨氟骨症骨周软组织钙化和骨化的可能机制。以小鼠皮肤成纤维细胞株（L929）为研究对象,应用MTT法、电镜观察及流式细胞术等方法,研究氟化物对成纤维细胞增殖活性、细胞周期和形态结构的变化。结果表明,成纤维细胞染氟后细胞增殖活力增强,合成和分泌功能旺盛,DNA合成明显增加。应用Elisa、RT-PCR和Western blot等方法,证明氟化物刺激成纤维细胞cbfa1、BMP-2、OCN及I型胶原从mRNA到蛋白的表达明显加强,证明成纤维细胞已有成骨表型的表达。染氟成纤维细胞bFGF、PDGF和IGF等生长因子的表达增加,可能在促进成纤维细胞成骨表型表达和成骨作用增强中起重要作用。应用激光扫描共聚焦显微镜检测,证明氟化物可导致成纤维细胞Ca2+一过性升高,其意义可能在于刺激细胞增殖、分化及某些生长因子的表达,进而促进成纤维细胞成骨功能的发挥。对比研究同样染氟条件对小鼠颅骨成骨样细胞的影响,在细胞增殖、cbfa1和OCN表达、BMP-2、bFGF、PDGF和IGF-1含量等方面两种细胞多具有相同的变化趋势,进一步证明了在氟化物的作用下,成纤维细胞向成骨细胞方向的发展。综合分析研究结果,认为氟化物刺激成纤维细胞向成骨细胞方向分化,成骨功能增强,在氟骨症骨周化骨发生机制中起重要作用。

论文目录

• 英文缩写词表
• 前言
• 文献综述 成纤维细胞的成骨能力及影响因素
• 一、成纤维细胞的成骨能力
• 二、成纤维细胞成骨功能的影响因素
• 三、氟对成纤维细胞的影响
• 四、氟化物、成纤维细胞和异位骨化
• 五、成纤维细胞成骨功能的应用前景
• 第一章 材料和方法
• 一、主要试剂和仪器
• 二、体外细胞培养
• 三、MTT 法检测成纤维细胞和成骨细胞增殖活性
• 四、染氟成纤维细胞光镜观察
• 五、染氟成纤维细胞电镜观察
• 六、流式细胞仪检测成纤维细胞细胞周期
• 七、成纤维细胞成骨结节观察
• 八、染氟成纤维细胞免疫组化检测
• 2+]_i'>九、共聚焦显微镜测定[Ca²⁺]_i
• 十、酶联免疫吸附（Elisa）法测定培养细胞上清液中基因表达产物和生长因子
• 十一、PT-PCR 法检测染氟成骨细胞和成纤维细胞成骨因子的表达
• 十二、Western Blot 方法检测染氟成纤维细胞BMP-2 蛋白的表达
• 第二章 实验结果
• 一、MTT 法检测染氟成纤维细胞和成骨细胞增殖活性
• 二、染氟成纤维细胞光镜观察
• 三、染氟成纤维细胞电镜观察
• 四、流式细胞仪检测染氟成纤维细胞细胞周期
• 五、染氟成纤维细胞成骨结节形成观察
• 六、染氟成纤维细胞免疫组化检测
• 2+]_i'>七、共聚焦显微镜测定染氟成纤维细胞和成骨细胞[Ca²⁺]_i
• 八、Elisa 法检测染氟成纤维细胞和成骨细胞成骨基因及骨生长因子的表达
• 1. 染氟对成纤维细胞和成骨细胞中cbfa1、OCN 表达的影响
• 2. 染氟对成纤维细胞和成骨细胞BMP-2、TGF-β、Smad2/3 表达的影响
• 3. 染氟对成纤维细胞和成骨细胞ALP、CoI 表达的影响
• 4. 染氟对成纤维细胞和成骨细胞bFGF、IGF-I、PDGF 表达的影响
• 5. 染氟对成纤维细胞和成骨细胞c-fos、c-jun 表达的影响
• 九、染氟成纤维细胞和成骨细胞总RNA 提取和RT-PCR 检测
• 十、Western blot 方法检测染氟FB BMP-2、OCN 蛋白
• 第三章 讨论
• 一、氟对成纤维细胞增殖活性的影响
• 二、氟对FB cbfa1、OCN、c-fos 和c-jun 表达的影响
• 三、氟对FB BMP-2、TGF-β和Smad2/3 表达的影响
• 四、氟对FB 中bFGF、PDGF 和IGF-I 表达的影响
• 五、染氟对FB 和OB 中ALP、Col I 表达的影响
• 2+([Ca²⁺]_i)在氟化物刺激FB 成骨活动中的作用'>六、细胞内Ca²⁺([Ca²⁺]_i)在氟化物刺激FB 成骨活动中的作用
• 七、FB 成骨表型转化在氟骨症骨周化骨发生中的作用
• 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 攻读博士学位期间主持和承担科研课题
• 攻读博士学位期间发表论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 附图
• 致谢