论文摘要
非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma, NHL）是一种常见的血液系统恶性肿瘤,死亡率较高。传统化疗药物对之有一定疗效,但存在较严重的副作用。针对B淋巴瘤细胞和B淋巴细胞表面CD20抗原的单克隆抗体治疗NHL取得了较好的效果。抗CD20嵌合抗体与CD20抗原结合以后,能够通过引发凋亡、ADCC、CDC等作用专一性的杀灭B淋巴瘤细胞和B淋巴细胞,而对其他正常组织无不良影响。副作用很小。本实验构建表达了抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。根据相关文献设计合成轻、重链可变区序列; 提取健康B细胞RNA,通过RT-PCR得到轻、重链恒定区序列。运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,再将测序正确的轻、重链基因连接至pIRES双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2.13mg/L。扩大培养阳性克隆1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白。SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95%,蛋白相对分子量与理论值吻合。以CD20+细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合。直接测定法测得抗体亲和常数为0.113nM。体外杀伤试验说明抗体能够通过引起直接杀伤作用杀伤细胞。
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