武义县第一人民医院西药房浙江武义321200
【中图分类号】Ｒ927【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2016）6
摘要美洛西林是一种广谱抗生素，主要用于大肠埃希菌、肠杆菌属、变形杆菌等革兰氏阴性菌中敏感菌株所致的呼吸系统、泌尿系统、消化系统、生殖系统等感染。美洛西林酸作为合成美洛西林的原料药，其中含有的微量杂质直接影响美洛西林产品的质量。本研究为美洛西林酸生产过程中的质量控制提供了有益的数据，同时也为其他药品中微量杂质的分离和结构确认提供了有益的参考。
关键词：美洛西林酸杂质制备液相色谱法高效液相色谱法
本试验通过研究影响美洛西林酸中杂质产生的因素，并对微量杂质进行分离，对其进行了核磁共振氢谱、红外光谱、质谱等结构确证。本研究为美洛西林酸生产过程中的质量控制提供了有益的数据，同时也为其他药品中微量杂质的分离和结构确认提供了一定的参考。
1.1高效液相色谱条件
仪器Waters2695色谱柱AgilentSB-C18(4.6×250mm,5um)波长210nm流动相?磷酸盐?缓冲液?乙腈=80:20，（磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾4.90g和磷氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000mL）流速1ml/min
1.2影响美洛西林酸中杂质含量的条件
1.2.1光照处理
分别称取美洛西林酸0.9909g和1.006g置于100mL的烧杯中，在其中一个烧杯中加入2mL水，搅拌均匀，一起置于红外灯下光照5h、10h、15h和24h。分别取少量不同光照时间的加水和不加水的样品，配制成1mg/mL的溶液，用磷酸盐缓冲液:乙腈=24:21（其中磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾4.90g和磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000mL）的溶液溶解，用上述液相条件的高效液相色谱进行分析。
1.2.2强酸处理
分别配制pH=1和pH=2的盐酸溶液50mL，加入1.0g美洛西林酸，置于磁力搅拌器上均匀搅拌2h，过滤烘干，取少量干燥的处理品，配制成1mg/mL的溶液，用磷酸盐缓冲液:乙腈=24:21（其中磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾4.90g和磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000mL）的溶液溶解，用上述液相条件的高效液相色谱进行分析。
1.2.3强碱处理
分别配制pH=12和pH=13的氢氧化钠溶液50mL，加入1.0g美洛西林酸，置于磁力搅拌器上均匀搅拌2h，过滤除去不溶物，得到澄清溶液，测得pH值分别为7和11。于澄清溶液中滴加1M盐酸溶液直至沉淀完全产生，过滤烘干，取少量干燥的处理品，配制成1mg/mL的溶液，用磷酸盐缓冲液:乙腈=24:21（其中磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾4.90g和磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000mL）的溶液溶解件的高效液相色谱进行分析。
2.1主要杂质的分离和富集
取pH=13的强碱处理品0.1g，溶于20mL的乙腈溶液中（水:乙腈=50:50），超声使其溶解，用微孔滤膜过滤，利用制备液相色谱进行分离，每次进样量不超过1mL，重复实验；利用旋转蒸发仪对收集到的杂质进行浓缩，加入少量乙腈萃取出杂质，过滤除去磷酸盐，再次浓缩，得到黄色油状物。在利用制备液相色谱分离杂质的过程中，将其他一些杂质收集起来，浓缩，为以后杂质分离提供材料。
2.2杂质的纯化
一次制备所得的杂质纯度在93%左右，须对其进行二次制备纯化杂质，使之纯度提高。在黄色有状物的杂质中加入3mL乙腈，使其充分溶解，利用制备液相色谱进行二次分离，进样量为1mL，利用旋转蒸发仪对分离得到的主要物质进行浓缩，加入少量乙腈萃取，过滤除去磷酸盐，旋干，得到黄色油状物，利用高效液相色谱对其纯度进行检测。
3.1光照处理结果
不同光照时间对美洛西林酸中的杂质有一定的影响，随着光照时间的延长,杂质影响的程度越大，但是增加了原产品中未含有的杂质，对已有的单个杂质的含量并没有很大的影响
3.2强酸处理结果
将美洛西林酸溶于乙腈水溶液（乙腈：水=50：50）中，于pH为2.3以下进行搅拌，处理，结果发现低于2.3的不同pH值盐酸溶液对美洛西林酸中杂质含量的影响较小
3.3强碱处理结果
美洛西林酸与氢氧化钠溶液会产生酸碱中和反应，形成美洛西林钠溶液，利用返滴定原理，于美洛西林钠溶液中滴加盐酸，使之重新转化为美洛西林酸。不同pH值的氢氧化钠溶液与美洛西林酸的中和程度不同，产生的结果也不同。pH大于8小于12的氢氧化钠溶液对美洛西林酸中杂质的影响较小，而pH为13的氢氧化钠溶液对美洛西林酸中的杂质影响明显，主成份钱有2个杂质的含量超过15%，美洛西林酸的含量只有24.21%
3.4杂质的纯度检测
根据制备液相分离结果，得到了一个较纯的物质（制备液相中的保留时间为t=7~12min），记为A，该物质为浅黄色油状液体，经高效液相色谱检测（条件同乙醇处理结果检测条件），通过面积归一法测得杂质的纯度为98.6%
参考文献
[1]S.G.B.Amyes,C.G..gemmell.Antibioticresistance[J].MedMicrobiol,1997,46:436-47.
[2]杨英,柯英,周璇等.22例美洛西林注射液致不良反应文献分析[J].中国药房,2007,18(17):1348-1349.
[3]临床常见致病菌对美洛西林/舒巴坦等4种杭菌药物体外杭活性研究[J].中华医院感染学杂志,2001,11(1):15-17.
[4]R.K.Gilpin,L.A.Pachla.Pharmaceuticalsandrelateddrugs[J].Anal.Chem,1987,59(12):174-197.
[5]赵永成，廖仲祥.注射用美洛西林钠的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2002，33(3):139．
[6]李珍,龚培力,曹繁点.药物杂质及其对安全性的影响[J].中国临床药理学杂志,2001,17(6):45l-453.[7]OmarIshrud,MuhammadZahid,ViqarUddinAhmadandYuanjiangPan.IsolationandStructureAnalysisofaGlucomannanfromtheSeedsofLibyanDates[J].AgricFoodChem,2001,49(8):3772-3774.1