裙带菜茎硫酸多糖抗病毒活性及其作用机理的初步研究

论文摘要

目的:研究裙带菜茎硫酸多糖的抗病毒活性,并对其作用机理进行初步研究,为抗病毒作用机理的进一步研究奠定基础,并为新型的抗单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type-1,HSV-1）药物的开发提供理论依据。方法:1.应用MTT法检测裙带菜茎硫酸多糖对细胞的毒性作用。2.应用细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）法,MTT法和空斑减数实验（plaqueredction assay,PRA）检测裙带菜茎硫酸多糖的抗病毒活性。3.应用CPE法和PRA法,采用四种不同的加药方式在细胞水平探讨裙带菜茎硫酸多糖抗HSV-1的作用机理。4.应用逆转录-聚核酶链反应（Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法检测裙带菜茎硫酸多糖对HSV-1 gD糖蛋白基因US6和DNA聚合酶基因UL30的影响。5.流式细胞仪分析裙带菜茎硫酸纯多糖对HSV-1感染导致的细胞周期紊乱的恢复情况。6.CPE法初步检测裙带菜茎硫酸多糖对病毒突变株的选择情况。结果:1.裙带菜茎硫酸粗多糖（UPP1）和裙带菜茎硫酸纯多糖（UPP2）对Vero细胞的半数毒性浓度(50%toxic concentration,TC50)均远大于10000μg/ml,空斑减数实验测得其对HSV-1的半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)分别为8.04μg/ml,13.54μg/ml,治疗指数（therapeutic index,TI）则分别大于1244,739。2.UPP1、UPP2对柯萨奇B3病毒（coxackie virus group B3,CVB3）、单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus type-2,HSV-2）所致的细胞病变都有明显的抑制作用,但是二者对伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）所致的细胞病变均无明显的抑制作用。3.四种不同加药方式判定裙带菜茎硫酸多糖抗病毒的作用阶段。结果显示UPP1无直接灭活病毒的作用,但是可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附;而UPP2对HSV-1有一定的直接灭活作用,但对病毒的吸附没有影响;二者均不影响病毒的释放,但二者在高剂量对病毒DNA的复制均有一定的抑制作用。4.与病毒对照组相比,UPP1能降低HSV-1 US6基因与UL30基因mRNA的表达水平,有显著性差异（p＜0.05）,UPP2能降低UL30基因的mRNA的表达水平（p＜0.05）,但对HSV-1US6基因的表达没有影响（p＞0.05）。5.UPP2能部分恢复HSV-1感染导致的细胞周期的改变。6.HSV-1在裙带菜茎硫酸纯多糖存在的情况下,连续扩增12代,未发现病毒突变株的出现。结论:本研究证实了裙带菜茎硫酸多糖具有抗HSV-1作用,其抗HSV-1作用机制有以下可能:（1）UPP1抑制病毒与细胞的吸附,抑制感染细胞中HSV-1 gD基因和DNA聚合酶基因的转录;（2）UPP2对病毒有直接灭活作用,抑制DNA聚合酶基因的转录;（3）UPP2能部分恢复病毒感染导致的紊乱的细胞周期。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语表
• 目录
• 1 绪论
• 1.1 多糖的生物活性研究现状
• 1.2 裙带菜研究现状
• 1.3 抗单纯疱疹病毒药物研究现状
• 1.4 传统医学对单纯疱疹病毒性疾病及裙带菜的认识
• 1.5 本研究的内容、意义和目标
• 2 裙带菜茎硫酸多糖抗病毒药效学研究
• 2.1 实验目的
• 2.2 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.4 统计学处理
• 2.5 实验结果
• 2.6 讨论
• 2.7 本章小结
• 3 裙带菜茎硫酸多糖抗HSV-1作用机理的初步研究
• 3.1 实验目的
• 3.2 材料和仪器
• 3.3 实验方法
• 3.4 统计学处理
• 3.5 实验结果
• 3.6 讨论
• 3.7 本章小结
• 4 结论与展望
• 4.1 全文结论
• 4.2 创新点
• 4.3 展望
• 参考文献
• 附图
• 硕士期间撰写投寄论文
• 致谢