SD大鼠孕期及哺乳期肝脏hepcidin的表达变化及调节机制的研究

论文摘要

铁在血氧转运及维持整个机体功能中起重要作用,它广泛参与机体的代谢过程,如电子传递、氧的运输和ATP的合成等。肝脏和脾脏是动物体内重要的储铁器官,在铁代谢中扮演十分重要的角色。随着研究的深入,肝脏内与铁转运相关的分子陆续被发现,如与铁摄取有关的转铁蛋白受体1、2、二价金属转运蛋白1；与铁释放有关的膜铁转运蛋白1、铜蓝蛋白、膜铁转运蛋白辅助蛋白,以及与铁储存相关的铁蛋白等。怀孕与哺乳是女性生命中重要的生理过程,其对整个机体铁代谢影响,以往的报道多集中在此过程中血常规和血清铁蛋白的变化规律的检测,而对此过程中铁代谢变化的调控机制缺乏研究。随着机体内重要的铁调节蛋白铁调素hepeidin被发现,以及hepcidin对机体铁代谢调控机制研究的不断深入,为我们认识孕期、哺乳期铁代谢变化的调控机制奠定了基础。本研究利用不同孕龄及哺乳期SD雌性大鼠,随机分为：未怀孕且年龄相同的雌鼠对照组（no pregnancy, NP）,妊娠9天雌鼠组（9 days pregnancy,9dP）,妊娠18天雌鼠（18 dayspregnancy,18dP）,哺乳1天组（1 day lactation,1 dL）,哺乳7天组（7 days lactation,7dL）,哺乳14天组（14 days lactation,14dL）,哺乳21天组（21 days lactation,21dL）。测定其血清铁水平,肝脏非血红素铁的含量。通过RT-PCR和Western-blot检测大鼠肝脏hepcidin mRNA、EPOR mRNA、BMP6 mRNA表达变化和肝、脾铁转运相关蛋白TfR2、P-ErK、TfR1、Ferritin-L、DMT1、FPN1、Cp表达。结果显示：1血清铁与转铁蛋白饱和度测定结果显示,9dP组、18dP组、1dL组、7dL组、14dL组、21dL组较NP组相比血清铁水平与转铁蛋白饱和度均有不同程度上升。2与NP组相比,9dP组中肝脏非血红素铁水平有显著上升；18dP组有极显著下降,1dL组、7dL组、14dL组、21dL组较NP组相比均有显著下降,随着哺乳期延长,1dL组、7dL组、14dL组、21dL组肝脏非血红素铁水平又开始缓慢上升。3 RT-PCR检测肝脏hepcidin mRNA表达的结果显示,与NP组相比,9dP组hepcidin mRNA表达水平明显升高,18dP组、1dP组、7dP组均明显下降。18dP组、1dL组、7dL组中肝脏EPOR mRNA较NP组均明显增加。western blot检测TfR2与P-ErK变化结果显示,与NP组相比,孕期TfR2呈现先增加后减少的趋势,1dL组、7dL组TfR2表达减少,而P-ErK在孕期各组呈现先减少后增加的趋势,在哺乳期7dL组表达减少。4 Western blot检测肝脾铁转运相关蛋白表达变化结果显示,与NP组相比,9dP组肝、脾中Ferritin-L表达升高,而18dP组、哺乳期各组均明显减少,21dL组肝脏Ferritin-L水平恢复正常。9dP组肝、脾中TfR1表达均减少,而18dP组、哺乳期各组中表达均升高,7dP组表达量最高。各组肝、脾中Cp的表达均明显升高。孕期大鼠脾脏中DMT1（+IRE）表达呈升高趋势,哺乳期各组间无明显变化,孕期肝脏DMT1（+IRE）表达无明显变化,哺乳期各组DMT1（+IRE）表达呈升高趋势。FPN1肝、脾中各组表达均有不同程度升高。结论：1母体内铁在怀孕9天时升高,孕后期及哺乳期机体铁持续降低。2孕期及哺乳前期hepcidin的下调与EPO有关,TfR2参与孕期及哺乳期hepcidin的下调过程,首次提出孕期及哺乳期hepciodin调节机制可能不同。3 Cp可能参与孕期及哺乳期肝、脾中铁的释放,在孕期及哺乳期肝、脾的铁摄取都主要通过经典的Tf-TfR方式。哺乳期DMT1（+IRE）在肝脏铁摄取中发挥一定作用。本实验首次从分子水平研究了怀孕与哺乳对机体铁代谢的影响,提出了孕期及哺乳期不同的hepcidin调节机制,及铁的摄取与释放机制。这些研究为今后更全面的了解在孕期及哺乳期的发生铁代谢的异常提供了实验基础和理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 第一部分 机体铁转运相关机制
• 第二部分 机体铁调节相关机制
• 第三部分 孕期及哺乳期铁代谢的研究现状
• 引言
• SD大鼠孕期及哺乳期肝脏hepcidin的表达变化及调节机制的研究
• 1 实验材料及试剂
• 1.1 实验动物
• 1.2 动物分组
• 1.3 实验试剂
• 1.4 主要仪器设备
• 2 实验方法
• 2.1 取材
• 2.2 血清铁水平测定
• 2.3 组织非血红素铁测定
• 2.4 逆转录聚合酶链式反应
• 2.5 Western-blot检测SD大鼠肝脾铁代谢相关蛋白表达的变化
• 3 实验结果
• 3.1 SD大鼠孕期及哺乳期不同阶段血清铁指标的变化（表1）
• 3.2 SD大鼠孕期及哺乳期不同阶段肝脏非血红素铁测定（图1）
• 3.3 SD大鼠孕期及哺乳期不同阶段肝脏hepcidin mRNA及相关调控分子表达水平的测定
• 3.4 Western-blot检测SD大鼠孕期及哺乳期不同阶段肝脏铁相关蛋白的表达变化
• 3.5 SD大鼠孕期及哺乳期不同阶段脾脏铁相关蛋白的表达变化
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 后记
• 个人简历