COX-2在大鼠排卵着床和蜕膜化过程中的作用

论文摘要

环氧合酶（COX）是前列腺素合成的终端限速酶，具有两种亚型，即COX-1和COX-2。以前的研究表明，COX-2基因敲除的小鼠是不孕的，并且排卵、受精、着床以及蜕膜化均出现异常。最近的研究表明，COX-2基因敲除小鼠的生殖缺陷主要依赖小鼠的遗传背景，与小鼠的品系相关。COX-1和COX-2在大鼠生殖过程中的表达和功能还未见报道。本论文利用免疫组织化学和原位杂交检测了COX-1和COX-2在大鼠早期妊娠子宫中的表达情况。在妊娠第4-5天，COX-1在腔上皮的免疫染色明显增强。在早期妊娠第6天，在子宫腔上皮上能检测到较高水平的COX-1免疫染色，在腔上皮下基质能检测到较低水平COX-1免疫染色。在第7天，在腔上皮和初级蜕膜中仅能够检测较低水平的COX-1免疫染色。随着妊娠的进行，在妊娠第8-9天的整个蜕膜中能检测到较低水平的COX-1免疫染色。在妊娠1-5天，检测不到COX-2蛋白和mRNA的表达。胚胎着床后，在着床胚胎周围的腔上皮下基质细胞中可检测到COX-2 mRNA和蛋白的表达。随着妊娠的进行，在早期妊娠第7-9天，COX-2主要在子宫系膜侧的基质细胞中表达。此外，还利用尼美舒利（Nimesulide）和尼氟灭酸（Nflumic acid）两种COX-2的抑制剂研究了COX-2在大鼠排卵、着床和蜕膜化过程中的作用。与对照组相比，两种抑制剂都能够抑制24日龄大鼠和性成熟大鼠的排卵。为了研究COX-2抑制剂对大鼠着床和蜕膜化的影响，我们选择在大鼠早期妊娠的第4天晚（20：00）和第5天早（08：00）给大鼠腹腔每天注射尼美舒利（40mg／kg），直到取材为止，每天计算着床位点的数目，并称着床位点的重量。尽管尼美舒利对大鼠着床位点数没有显著影响，但是能够显著地减少着床位点的重量。与对照组相比，尼美舒利处理后，大鼠的妊娠期明显增长，大鼠的窝产仔数和出生仔重显著减少。此外，尼美舒利和尼氟灭酸能够显著减少大鼠人工诱导蜕膜化子宫的蜕膜重量。与对照组相比，尼美舒利能够抑制或者减弱COX-2、PPARδ、HB-EGF、Snail、phospho-STAT3、phospho-p38 MAPK以及Vimentin的表达，而COX-1在腔上皮下基质中的表达有所增强。 总之，尼美舒利能够显著减少大鼠的排卵数，延迟大鼠胚胎着床和蜕膜化，减少窝产仔数和仔出生重，并且延长妊娠期。这些结果表明，COX-2可能在大鼠的排卵、着床和蜕膜化过程中起重要的作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1.1 COX的结构
• 1.2 COX的定位
• 1.3 COX的分布和诱导
• 1.4 COX基因敲除小鼠的表型
• 1.5 COX抑制剂的种类及其作用机理
• 1.6 COX的功能
• 1.6.1 COX与炎症反应
• 1.6.2 COX与肿瘤发生
• 1.6.3 COX与血管发生
• 1.6.4 COX在生殖过程中的作用
• 1.7 目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 动物模型
• 2.3 血管通透性测定
• 2.4 免疫组织化学
• 2.4.1 石蜡切片的制备
• 2.4.2 免疫组织化学流程
• 2.5 原位杂交
• 2.5.1 冰冻切片的制备
• 2.5.2 原位杂交试剂配方
• 2.5.3 原位杂交流程
• 2.6 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 COX在大鼠子宫中的表达
• 3.1.1 COX-1
• 3.1.2 COX-2
• 3.2 COX-2抑制剂对大鼠排卵的影响
• 3.2.1 COX-2抑制剂对24日龄大鼠排卵的影响
• 3.2.2 COX-2抑制剂对性成熟大鼠排卵的影响
• 3.3 COX-2抑制剂对大鼠着床的影响
• 3.3.1 不同剂量的COX-2抑制剂对大鼠着床的影响
• 3.3.2 尼美舒利对大鼠着床位点数的影响
• 3.4 尼美舒利对大鼠着床位点血管通透性的影响
• 3.5 尼美舒利对大鼠蜕膜化的影响
• 3.5.1 尼美舒利对大鼠着床位点重量的影响
• 3.5.2 尼美舒利和尼氟灭酸对大鼠人工诱导蜕膜化的影响
• 3.6 尼美舒利对大鼠妊娠期、产仔数以及出生仔重的影响
• 3.6.1 窝产仔数
• 3.6.2 出生仔重
• 3.6.3 妊娠期
• 3.7 尼美舒利对着床相关基因表达的影响
• 3.7.1 COX-1
• 3.7.2 COX-2
• 3.7.3 mPGES-1
• 3.7.4 PPARδ
• 3.7.5 HB-EGF
• 3.7.6 Snail
• 3.7.7 Vimentin
• 3.7.8 phospho-p38
• 3.7.9 phospho-STAT3
• 4 讨论
• 4.1 COX-2在排卵过程中的作用
• 4.2 COX-2在着床中的作用
• 4.3 COX-2在蜕膜化过程中的作用
• 4.4 COX-2在着床和蜕膜化过程中可能的信号通路
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读博士学位期间发表的论文