论文摘要
茶树是我国重要的经济作物之一,栽培历史悠久,分布广泛,而且种质资源极为丰富。然而茶树是多年生异花授粉的木本植物,在常规的遗传研究中有许多难以解决的问题。DNA分子标记可为茶树提供准确、可靠的遗传标记,对于茶树遗传多样性的研究和优质品种资源的鉴定都具有重要作用。近年来发展起来的RAPD标记技术已广泛应用于茶树遗传育种与遗传多样性的研究,但RAPD技术容易受反应条件的影响,重复性和稳定性较差,因此发展特异性PCR标记技术成为今后茶树分子生物学新的研究方向之一。SCAR标记是在RAPD技术的基础上发展起来的一种新型分子标记技术,相对其他分子标记,操作简单,成本低,重复性好,提高了分子标记辅助选择育种的效率,非常适合于大量样品的快速分析,在水稻、玉米、油菜、小麦等作物中已取得了一定的成功,然而在茶树遗传育种中SCAR标记的开发和应用研究刚刚起步。因此,今后可以加强SCAR标记在茶树育种方面的开发和应用研究工作。本实验中以安徽农业大学茶树品种园的10个茶树品种为实验材料,采用改良的SDS法提取它们的基因组DNA,并运用优化的RAPD反应体系对茶树基因组DNA进行遗传差异分析。随机引物S234、S89、S4分别在龙井长叶、白毫早、福云6号中扩增得到长度为1185bp、498bp、1622bp的差异片段,命名为CY1185、BHZ498、FY1622。根据它们的测序结果并在原有随机引物序列的基础上分别设计了1对特异引物,其中CY1185的特异引物为SA1/SA2,BHZ498的特异引物为SB1/SB2,FY1622的特异引物为SC1/SC2。退火温度为55℃时,SB1/SB2可以在茶树基因组DNA中稳定扩增,当退火温度提高到60℃时,SA1/SA2和SC1/SC2可以实现稳定扩增,反应的其它条件没有改变。用这3对特异引物对10个茶树品种的基因组DNA进行扩增均获得了预期结果,即引物SA1/SA2只有在龙井长叶中扩增出唯一的一条扩增带,引物SB1/SB2只有在白毫早中扩增出唯一的一条扩增带,引物SC1/SC2只有在福云6号中扩增出唯一的一条扩增带,而这三对引物在其他供试茶树材料中无相应的扩增带,重复多次,结果稳定可靠,这表明RAPD标记已成功转化成SCAR标记。本研究试图找出一条将茶树RAPD标记转换成SCAR标记具体可行的方法,既保持了原分子标记的种质鉴定功能,又获得了常规PCR稳定可靠,易于操作的特点,使分子标记技术应用于茶树种质鉴定与生产实践变得更简便更易于推广,在茶树种质资源的合理开发与利用中具有广阔的应用前景。