论文摘要
本研究用标准AIV H9N2亚型毒株接种SPF鸡胚,收获尿囊液。经过差速离心,进行蔗糖密度梯度超速离心。根据流感病毒的浮密度（g/cm3）范围（1.19～1.25）,确定蔗糖的密度梯度为30～60%。根据AIV的直径范围（80～120nm,平均为100nm）,确定离心转速为30000r/min,离心时间3h。再经过透析后,用分光光度法测定其病毒含量为1.638mg/mL。 将该病毒抗原制成油佐剂灭活疫苗,免疫SPF鸡,收集高免血清,用（NH4）2SO4法提取血清中的免疫球蛋白G（IgG）,测定蛋白含量为IgG浓度为4.090mg/mL。用以上提取的鸡抗AIV IgG作为免疫原,制备完弗氏全佐剂和不完全弗氏佐剂疫苗免疫8周龄雌性SPF BALB/c小鼠。首免采用完全弗氏佐剂疫苗于小鼠背部皮下多点注射,二免、三免用不完全弗氏佐剂疫苗,每次免疫间隔10天。细胞融合前三天再加强免疫注射IgG（腹腔注射,0.25mL/只）。 小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞制备饲养细胞。取免疫BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1在PEG（MW4000）作用下进行融合,同时加入饲养细胞,在HAT-1640完全培养基内培养,放入含5%CO2培养箱内培养。 本研究采用兔抗AIV血清IgG作为包被抗原,以间接ELISA法检测杂交瘤细胞培养上清液,筛选到分泌抗鸡和兔共有独特型表位抗体的融合细胞,从而获得分泌目的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经过预试验,表明最适抗原包被量为102μg/mL。采用间接ELISA检测法,筛选获得3株（2E6H1、2E6G4、3E3D7）分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。3株融合细胞培养上清液中的单克隆抗体效价均为2-4,小鼠腹水中的单抗效价是1:3200。经检测表明,三株细胞系产生的单克隆抗体仅与相应的鸡抗
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- [5].南疆鸡群感染H9N2亚型AIV诊断分析[J]. 江苏农业科学 2015(11)
- [6].检测H9亚型AIV的压电免疫传感器的研究[J]. 安徽农业科学 2011(25)
- [7].检测H9亚型AIV的压电免疫传感器研究(英文)[J]. Agricultural Science & Technology 2011(10)
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- [9].H_9N_2亚型AIV排毒及形成气溶胶的研究[J]. 微生物学通报 2008(10)
- [10].黄芩苷在鸡胚上对鸡常见病毒AIV、NDV、IBV的作用效果[J]. 中兽医医药杂志 2015(02)
- [11].ApoAI-CⅢ-AIV基因簇多态性对痛风伴胰岛素抵抗患者高脂血症的作用[J]. 预防医学论坛 2013(05)
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