本文主要研究内容
作者孙华,马红霞,丁梦军,李坡,石洁,刘树森（2019）在《拟轮枝镰孢ATMT突变体库的构建及分析》一文中研究指出：【目的】通过建立适用于拟轮枝镰孢（Fusarium verticillioides）的农杆菌介导遗传转化体系,构建绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的拟轮枝镰孢ATMT（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation）突变体库,并对突变体库进行筛选分析,为研究拟轮枝镰孢在玉米果穗上的侵染途径和致病的分子机制打下基础。【方法】筛选头孢噻肟钠（cefotaxime sodium,Cefo）和氨苄青霉素钠（ampicillin sodium,Amp）对根癌农杆菌AGL-1的抑菌浓度和拟轮枝镰孢对潮霉素B（hygromycin B）的敏感浓度;以含有绿色荧光蛋白基因（GFP）、潮霉素抗性基因（HPH）的穿梭质粒为载体,通过ATMT构建GFP标记的拟轮枝镰孢突变体库;利用潮霉素抗性筛选、GFP的特异性引物进行PCR检测和荧光显微镜观察,检测分析T-DNA插入情况及转化子稳定性;从突变体库中随机挑选9个转化子菌株并进行分析,对其产孢量、分生孢子萌发率、致病力等进行测定。【结果】通过农杆菌抑菌试验发现当Cefo/Amp的浓度为150/150μg·mL-1时,AGL-1生长受到抑制;当潮霉素B的浓度为150μg·mL-1时,拟轮枝镰孢完全丧失生长能力。利用优化后的ATMT转化获得了2 465株GFP标记的拟轮枝镰孢转化子;转化子在不含潮霉素B的PDA培养基上连续转接5代再转到含潮霉素B的培养基上仍能正常生长,说明HPH成功插入野生型基因组且稳定遗传;利用GFP特异性引物对转化子进行PCR检测,测序结果显示与NCBI中GFP（登录号:LC420351.1）的同源性为99.26%,表明GFP已成功整合到野生型基因组中;转化子菌丝和孢子在荧光显微镜下观察均呈现绿色,而野生型菌株未观察到任何荧光,表明GFP转移到拟轮枝镰孢野生型菌株基因组中,且能够成功表达。对部分转化子分析发现,与野生型相比转化子54的产孢量明显增多,约为野生型的1.9倍;转化子24的分生孢子萌发率在相同时间内明显下降;转化子13的致病力增强,病害级别达到9级,转化子33和16致病力减弱为3级,转化子4致病力最弱为1级,部分转化子生物学性状未发生明显变化。【结论】构建了农杆菌介导GFP标记的拟轮枝镰孢突变体库,筛选分析获得了产孢量、孢子萌发率、致病力发生变化的突变体,为进一步研究拟轮枝镰孢侵染玉米果穗的途径和致病的分子机制打下了基础。
Abstract
【mu de 】tong guo jian li kuo yong yu ni lun zhi lian bao （Fusarium verticillioides）de nong gan jun jie dao wei chuan zhuai hua ti ji ,gou jian lu se ying guang dan bai （green fluorescent protein,GFP）biao ji de ni lun zhi lian bao ATMT（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation）tu bian ti ku ,bing dui tu bian ti ku jin hang shai shua fen xi ,wei yan jiu ni lun zhi lian bao zai yu mi guo sui shang de qin ran tu jing he zhi bing de fen zi ji zhi da xia ji chu 。【fang fa 】shai shua tou bao sai wo na （cefotaxime sodium,Cefo）he an bian qing mei su na （ampicillin sodium,Amp）dui gen ai nong gan jun AGL-1de yi jun nong du he ni lun zhi lian bao dui chao mei su B（hygromycin B）de min gan nong du ;yi han you lu se ying guang dan bai ji yin （GFP）、chao mei su kang xing ji yin （HPH）de chuan suo zhi li wei zai ti ,tong guo ATMTgou jian GFPbiao ji de ni lun zhi lian bao tu bian ti ku ;li yong chao mei su kang xing shai shua 、GFPde te yi xing yin wu jin hang PCRjian ce he ying guang xian wei jing guan cha ,jian ce fen xi T-DNAcha ru qing kuang ji zhuai hua zi wen ding xing ;cong tu bian ti ku zhong sui ji tiao shua 9ge zhuai hua zi jun zhu bing jin hang fen xi ,dui ji chan bao liang 、fen sheng bao zi meng fa lv 、zhi bing li deng jin hang ce ding 。【jie guo 】tong guo nong gan jun yi jun shi yan fa xian dang Cefo/Ampde nong du wei 150/150μg·mL-1shi ,AGL-1sheng chang shou dao yi zhi ;dang chao mei su Bde nong du wei 150μg·mL-1shi ,ni lun zhi lian bao wan quan sang shi sheng chang neng li 。li yong you hua hou de ATMTzhuai hua huo de le 2 465zhu GFPbiao ji de ni lun zhi lian bao zhuai hua zi ;zhuai hua zi zai bu han chao mei su Bde PDApei yang ji shang lian xu zhuai jie 5dai zai zhuai dao han chao mei su Bde pei yang ji shang reng neng zheng chang sheng chang ,shui ming HPHcheng gong cha ru ye sheng xing ji yin zu ju wen ding wei chuan ;li yong GFPte yi xing yin wu dui zhuai hua zi jin hang PCRjian ce ,ce xu jie guo xian shi yu NCBIzhong GFP（deng lu hao :LC420351.1）de tong yuan xing wei 99.26%,biao ming GFPyi cheng gong zheng ge dao ye sheng xing ji yin zu zhong ;zhuai hua zi jun si he bao zi zai ying guang xian wei jing xia guan cha jun cheng xian lu se ,er ye sheng xing jun zhu wei guan cha dao ren he ying guang ,biao ming GFPzhuai yi dao ni lun zhi lian bao ye sheng xing jun zhu ji yin zu zhong ,ju neng gou cheng gong biao da 。dui bu fen zhuai hua zi fen xi fa xian ,yu ye sheng xing xiang bi zhuai hua zi 54de chan bao liang ming xian zeng duo ,yao wei ye sheng xing de 1.9bei ;zhuai hua zi 24de fen sheng bao zi meng fa lv zai xiang tong shi jian nei ming xian xia jiang ;zhuai hua zi 13de zhi bing li zeng jiang ,bing hai ji bie da dao 9ji ,zhuai hua zi 33he 16zhi bing li jian ruo wei 3ji ,zhuai hua zi 4zhi bing li zui ruo wei 1ji ,bu fen zhuai hua zi sheng wu xue xing zhuang wei fa sheng ming xian bian hua 。【jie lun 】gou jian le nong gan jun jie dao GFPbiao ji de ni lun zhi lian bao tu bian ti ku ,shai shua fen xi huo de le chan bao liang 、bao zi meng fa lv 、zhi bing li fa sheng bian hua de tu bian ti ,wei jin yi bu yan jiu ni lun zhi lian bao qin ran yu mi guo sui de tu jing he zhi bing de fen zi ji zhi da xia le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学的孙华,马红霞,丁梦军,李坡,石洁,刘树森，发表于刊物中国农业科学2019年08期论文，是一篇关于玉米论文,拟轮枝镰孢论文,突变体库论文,绿色荧光蛋白论文,转化子论文,中国农业科学2019年08期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学2019年08期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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