烯丙基羟化酶产生菌的筛选及其生物转化制备1α-羟基维生素D的研究

论文摘要

活性维生素D类药物适用于防治骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进以及减退、营养和吸收障碍引起的佝偻病和骨软化症、假性缺钙的佝偻病和骨软化症等。其本身是人体肝和肾的代谢产物,但是从生物组织中提取这些物质的工作量巨大,收率极低,显然无法满足临床的需求。化学合成方法来制造则需进行多步的基团保护和脱保护,运用光照反应,开环和异构化,合成步骤繁多,分离纯化复杂,合成收率很低。本文采用生物转化法制备活性维生素D,为生物制备活性维生素奠定了基础。生物转化能够进行某些化学方法难于进行或不能合成的反应,产物立体构型单一,且转化条件温和。首先我们从自然界采集样品中分离并筛选了烯丙基羟化酶产生菌,得到了四株生长状况良好,转化能力强的菌种。对其进行了菌种鉴定及利用产生菌生物转化制备活性维生素D。转化过程中对转化产物的检测采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)。经制备HPLC,收集转化产物,通过核磁共振氢谱和质谱检测,结果表明：纯化得到的转化产物与标准品的结构一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 甾体类微生物转化的研究
• 1.2 烯丙基羟化酶产生菌及其酶系研究现状
• 1.3 维生素D简介
• 1.4 活性维生素D的介绍
• 1.5 活性维生素D类药物制造工艺技术现状
• 1.6 生物转化法简述及其特点
• 第2章 实验材料、内容和分析方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 主要药品与试剂
• 2.1.2 仪器设备
• 2.2 实验内容
• 2.2.1 菌种的分离
• 2.2.2 烯丙基羟化酶产生菌的筛选
• 2.3 实验分析方法
• 2.3.1 薄层色谱法
• 2.3.2 高效液相色谱法
• 第3章 菌种的分离
• 3.1 样品采集
• 3.2 培养基
• 3.3 菌种的分离步骤
• 第4章 烯丙基羟化酶产生菌的筛选
• 4.1 样品
• 4.2 培养基
• 4.3 烯丙基羟化酶产生菌筛选
• 4.3.1 摇瓶培养
• 4.3.2 生物转化
• 4.3.3 转化菌的筛选
• 第5章 转化产物的分离与鉴定
• 5.1 方法
• 5.2 结果
• 第6章 烯丙基羟化酶产生菌的鉴定
• 6.1 放线菌的形态构造及菌落特征
• 6.1.1 菌丝的类型及形态
• 6.1.2 孢子形态
• 6.1.3 菌落特征
• 6.2 产生菌的形态观察
• 6.2.1 方法
• 6.2.2 结果
• 6.2.3 结论
• 6.3 产生菌的生理生化测定
• 6.3.1 方法
• 6.3.2 结果
• 6.4 产生菌的最终鉴定结果
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文及科研成果