低渗对比剂对犬肾小管上皮细胞凋亡及其蛋白表达的影响

论文摘要

目的通过对家犬静脉内高压注入不同浓度、不同剂量的低渗对比剂，研究其对肾小管上皮细胞凋亡的作用，及对肾小管上皮细胞中Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响，进一步探讨对比剂肾病发生的可能机制，并为临床合理使用低浓度低剂量对比剂以降低对比剂副反应提供实验依据。方法健康家犬36只（辽宁医学院动物实验中心提供），雌雄不限，月龄（15月～20月）体重12-17kg，雌性未孕。将犬随机分为6组，按照不同浓度和剂量（分别换算成相当于人用剂量1.5ml/kg、1.0ml/kg）碘对比剂（碘普罗胺）及等剂量生理盐水分为：A1-370mgI/ml,1.5ml/kg；A2-370mgI/ml,1.0ml/kg；B1-300mgI/ml,1.5ml/kg；B2-300mgI/ml,1.0ml/kg；C1-生理盐水,1.5ml/kg；C2-生理盐水,1.0ml/kg。采取犬静脉内高压注射（1.0ml/s）。注射后48小时取犬肾脏，HE染色观察各组肾小管上皮细胞形态学变化，TUNEL法检测肾小管上皮细胞的凋亡情况，免疫组化方法观察其中Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达部位，Western方法半定量检测肾脏髓质中Caspase-3及其活化片段P17表达量的变化。结果1、各组肾小管上皮细胞形态学改变：A1组肾小管上皮细胞水肿明显，出现较大面积肾小管上皮细胞空泡样变性并见炎性细胞浸润；A2组及B1组肾小管上皮细胞水肿及空泡样变性面积较A1组略小；B2组以水肿为著，可见少量肾小管上皮细胞空泡样变；两对照组（C1，C2）未见明显损伤。2、各组犬肾小管上皮细胞凋亡率比较：各组因对比剂剂量或浓度的降低，凋亡率有所减少，除对照组（C1、C2）组间差异无统计学意义（P＞0.05）外，各组间差异均有显著性（P＜0.01）。3、免疫组化观察表达部位：Bcl-2见于肾小管上皮细胞胞浆内棕黄色颗粒表。Bax在各组肾小管上皮细胞胞浆中，呈现不同程度棕色颗粒，基本均匀表达；Caspase-3主要在肾小管上皮细胞胞浆中表达，部分在胞核中表达，棕黄色颗粒基本均匀分布，但程度不同，对比剂组胞浆胞核中均见表达，生理盐水两组表达多在胞浆中表达，偶见于胞核表达。4、各组犬肾小管上皮细胞中Bcl-2含量比较：对比剂各组与两对照组比较差异均有显著性（P＜0.01），两对照组（C1，C2）组间差异无统计学意义（P＞0.05），A1与A2及B1与B2组间比较差异有显著性（P＜0.01），剂量降低表达量也降低。A1与B1及A2与B2组间表达差异无统计学意义（P＞0.05）。5、各组犬肾小管上皮细胞中Bax含量比较：除两对照组（C1，C2）外，其余各组间差异有显著性（P＜0.01），A1组表达量最高，并且浓度或剂量降低表达量也降低。两对照组均见少量表达，两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。6、各组肾小管上皮细胞Bax/Bcl-2比值变化：因对比剂浓度或剂量的减少而明显降低，除两盐水组（C1、C2）组间差异无统计学意义（P＞0.05）外，各组间差异均有显著性（P＜0.01）。7、各组犬肾小管上皮细胞中Caspase-3及其活化片段蛋白的含量的变化：除两对照组（C1，C2）组间差异无统计学意义（P＞0.05）外，其余各组间差异均有显著性（P＜0.01），并且浓度或剂量降低表达量也降低。结论1、低渗对比剂常规浓度及剂量能引起犬肾小管上皮细胞凋亡，且与浓度及剂量有关，适当降低低渗碘对比剂浓度和剂量可使犬肾小管上皮细胞凋亡率相对降低，凋亡相关基因蛋白表达量相对减少，从而可能降低对比剂副反应的发生。2、体内引入的低剂量、低浓度低渗对比剂使肾小管上皮细胞中Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白及其活化片段表达量均相对降低，三者在体内可能参与了肾小管上皮细胞凋亡的调控。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语表
• 前言
• 试验材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 本研究创新性自我评价
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
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