论文摘要
肾脏恶性肿瘤约占所有恶性肿瘤中的3.5%,它也是泌尿生殖系统最常见的肿瘤之一。肾细胞癌是最常见的肾脏恶性肿瘤,它的发病率在过去的30年不断升高。由于转移性肾细胞癌对于放疗和化疗高度拒抗,约三分之一的肾癌患者在初始诊断时已经发生转移,同时约有30-40%的患者在手术切除原发灶后五年内发生远处转移,因此肾细胞癌的临床预后很差。目前已有文献报道多种血液系统恶性肿瘤和实体瘤中存在肿瘤干细胞。和正常的干细胞相似,肿瘤干细胞也具有自我更新的能力,同时它还具有起始和维持肿瘤生长的潜能。由于肿瘤干细胞无法被传统的抗癌手段完全清除,它们可能是局部复发和远处转移的根源。到目前为止有关人肾癌干细胞的分离鉴定报道很少。从上世纪90年代开始,在酪氨酸激酶抑制剂出现之前,IFN-α和IL-2免疫治疗是治疗转移性肾细胞癌的标准制剂。但是,IFN-α和IL-2免疫治疗的有效率很低,一直徘徊在5%至20%,肿瘤免疫逃逸可能是影响其疗效的主要因素之一。因此,探讨肾癌干细胞介导的免疫逃逸具有重要意义。本研究中,我们尝试采用体外无血清限定培养基富集人肾癌细胞系SK-RC-42的干细胞,初步探讨其生物学特性及其介导的免疫逃逸机制。我们发现SK-RC-42贴壁细胞在限定培养基中可以形成神经球体样肿瘤球。该肿瘤球能多次传代,体外具有自我更新能力。将肿瘤球接种至含血清培养基中时可贴壁生长,具有分化潜能。肿瘤球中侧群细胞含量与贴壁细胞相比明显升高。肿瘤球较高水平表达干细胞相关基因：Oct3/4、Bmi-1、Nanog、β-catenin。此外,肿瘤球体外高度耐受化疗药物和放射线处理,在免疫缺陷小鼠体内具有较强的致瘤能力。肿瘤球和贴壁生长的细胞均高水平表达干细胞相关分子：CD44、CD24和CD105,而CD133、CD34几乎无表达。肿瘤球高水平表达HLA-I类分子,而HLA-DR和共刺激分子CD80、CD86几乎无表达;肿瘤球表面FAS和FASL分子表达均明显低于贴壁生长细胞；约10%左右的肿瘤球表达B7-H1；几乎所有的肿瘤球均高水平表达膜补体调节蛋白以及FoxP3；肿瘤球的肿瘤相关抗原hTERT和HER2分子表达明显下调。功能试验表明肿瘤球具有显著诱导正常人T细胞凋亡、诱导调节性T细胞和髓系来源的抑制细胞生成。本研究表明肿瘤球培养可以富集人肾癌细胞系SK-RC-42肿瘤干细胞.SK-RC-42肾癌肿瘤球可能通过多种途径逃逸机体免疫系统的攻击。通过对其细胞生物学特性以及免疫逃逸机制的进一步深入探讨有望为肾癌治疗提供新的思路。