经心包腔转染腺病毒血管内皮生长因子165基因对猪急性心肌梗死的血管形成及心功能的影响

论文摘要

第一部分 复制缺陷的重组腺病毒经心包腔转染猪急性心肌梗死模型的实验研究 目的 建立猪急性心肌梗死模型，评价重组腺病毒经心包腔的转染效率及持续时间。 方法 应用磷酸钙沉淀方法制备携带大肠杆菌LacZ基因复制缺陷的重组腺病毒（Ad-LacZ），随机将12头中国小型猪分为实验组和对照组，每组6头。两组猪均采用球囊堵塞前降支第一对角支远端以建立心肌梗死模型，心肌梗死模型建立后即刻，采用经皮剑突下穿刺方法，将中心静脉导管插入心包腔内转染Ad-LacZ。实验组：以含胶原酶1200u及透明质酸酶3000u的生理盐水2ml预处理心包后，在心包腔内注射含Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u的生理盐水液1ml；对照组：同样方法预处理心包后，在心包腔内注射生理盐水1ml。分别于注射后3天、7天及28天处死动物，对缺血心肌进行染色及病理观察。 结果 冠状动脉造影证实前降支远端完全闭塞，病理显示心肌有缺血和梗死；实验组注射Ad-LacZ基因后第3天、第7天及28天后X-gal染色有阳性细胞，以第7天最明显，对照组无阳性细胞。 结论 应用球囊堵塞法可成功建立猪急性心肌梗死模型，胶原酶及透明质酸酶预处理心包后，腺病毒载体可转染缺血心肌，并持续表达4周。第二部分 经心包腔转染腺病毒血管内皮生长因子165基因对猪冠脉血管形成影响的研究 目的 探讨以腺病毒为载体的血管内皮生长因子165(Ad-VEGF165)基因经心包腔转染的表达规律，对缺血心肌血管生成的作用。 方法 随机将20头中国小型猪分为实验组和对照组，每组10头，每组又分3d（n=2）、7d（n=2）及28d（n=2）三个亚组。采用球囊堵塞前降支第一对角支远端建立心肌梗死模型，成模后即刻，实验组：采用经皮剑突下穿刺中心静脉导管心包腔内转染，以含胶原酶1200u及透明质酸酶3000u的生理盐水2ml预处理心包后，在心包腔内注射含Ad-VEGF165基因2.0×109pfu的生理盐水液1ml；对照组：同样方法预处理心包后，在心包腔内注射生理盐水1ml。注射后3天、7天及28天分别用免疫组化、超声心动图对缺血心肌血管新生情况进行检测，并以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆、心包及心肌组织中Ad-VEGF165的表达。 结果 Ad-VEGF165基因经心包腔转染缺血心肌组织后，在心包及组织中成高表达，于7达到高峰，28天降至基线水平，血浆中无目的基因的表达；28天时，实验组缺血心肌微血管密度（MVD）、心功能均明显高于对照组[MVD，517.0±75.7／mm2 vs 226.5±54.1／mm2，P=0.009；LVEF 72.11±5.2％ vs 55.14±4.37％，P=0.005]。 结论 用胶原酶及透明质酸酶预处理心包腔后，经其转染Ad-VEGF165可以诱导急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表达，促进缺血心肌组织血管新生并能改善心功能。 第三部分 重组腺病毒血管内皮生长因子165基因心包腔与冠状动脉转染心肌的比较研究 目的 比较经心包腔与冠状动脉转染重组腺病毒血管内皮生长因子165基因(Ad-VEGF165)的有效性。方法 20头小型猪随机分为心包转染组（心包组）和冠脉转染组（冠脉组），两组猪均采用球囊堵塞前降支第一对角支远端以构建心肌梗死模型，心包组在心肌梗死模型建立后即刻，采用经皮剑突下穿刺将中心静脉导管插入心包腔内，以胶原酶和透明质酸酶预先处理心包，然后注射Ad-VEGF1651.0ml（2×109pfu）；冠脉组在心肌梗死模型建立后即刻，经冠脉注射Ad-VEGF1651.0ml（2×109pfu），于注射前后3、7、28d分别测定组织内VEGF水平、微血管密度（MVD）、心功能。 结果 心包组和冠脉组的心脏均表达有VEGF165基因，组织内VEGF水平在7天时达高峰，28天时降至基线水平，前组高于后组（702±85pg／ml vs 592±59 pg／ml，P=0.026）。而两组的微血管密度、心功能随转染时间延长均明显增加，但心包组优于冠脉组（28d，MVD，517.0±75.7／mm2 vs 326.4±24.1／mm2，P=0.001；FS，32.9±2.2％ vs 30.6±2.1％，P=0.049；LVEF，72.11±5.2％ vs 65.87±2.16％，P=0.034）。 结论 导管介导的心包腔与冠脉转染Ad-VEGF165基因治疗心肌缺血是有效的、切实可行的，而前者可能是更有前途的新方法。 第四部分 心包穿刺简易装置在基因转染中的应用 目的 探讨自制心包穿刺装置转染心脏的安全性、可行性。方法 应用磷酸钙沉淀方法制备携带大肠杆菌LacZ基因复制缺陷的重组腺病毒（Ad-LacZ），将12头中国小型猪分为实验组和对照组，采用球囊堵塞前降支第一对角支远端，心肌梗死模型建立后即刻，采用自制简易心包腔穿刺装置经皮剑突下穿刺，成功后置中心静脉导管于心包腔内并行转染，28d后处死。实验组：胶原酶1200u及透明质酸酶3000u预处理心包后，在心包腔内注射Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u；对照组：同样方法预处理心包后，在心包腔内注射生理盐水1ml。于注射后3d、7d及28d分别对缺血心肌进行染色及病理观察。结果 冠状动脉造影证实前降支远端完全闭塞，病理显示心肌有缺血和梗死；实验组注射Ad-LacZ基因后第3d、第7d及28d后X-gal染色有阳性细胞，以第7d最明显，对照组无阳性细胞。结论 自制的心包腔简易穿刺装置将腺病毒载体转染至缺血心肌是安全的，可行的，并且腺病毒可持续表达4周。目的 探讨自制心包穿刺装置转染心脏的安全性、可行性。方法 应用磷酸钙沉淀方法制备携带大肠杆菌LacZ基因复制缺陷的重组腺病毒（Ad-LacZ），将12头中国小型猪分为实验组和对照组，采用球囊堵塞前降支第一对角支远端，心肌梗死模型建立后即刻，采用自制简易心包腔穿刺装置经皮剑突下穿刺，成功后置中心静脉导管于心包腔内并行转染，28d后处死。实验组：胶原酶1200u及透明质酸酶3000u预处理心包后，在心包腔内注射Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u；对照组：同样方法预处理心包后，在心包腔内注射生理盐水1ml。于注射后3d、7d及28d分别对缺血心肌进行染色及病理观察。结果 冠状动脉造影证实前降支远端完全闭塞，病理显示心肌有缺血和梗死；实验组注射Ad-LacZ基因后第3d、第7d及28d后X-gal染色有阳性细胞，以第7d最明显，对照组无阳性细胞。结论 自制的心包腔简易穿刺装置将腺病毒载体转染至缺血心肌是安全的，可行的，并且腺病毒可持续表达4周。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 复制缺陷的重组腺病毒经心包腔转染猪急性心肌梗死模型的实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 经心包腔转染腺病毒血管内皮生长因子165基因对猪冠脉血管形成影响的研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 重组腺病毒血管内皮生长因子165基因心包腔与冠状动脉转染心肌的比较研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第四部分 心包穿刺简易装置在基因转染中的应用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述 促血管新生基因治疗缺血性心脏病的研究进展
• 参考文献
• 在职学习期间已发和待发出版物
• 致谢